小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其重组真核表达载体的构建

http://www.100md.com 郭军；丁杰；喻召才；李韧；郭长存；樊代明

α1|3-半乳糖基转移酶|Galα(1,3)Gal|RT-PCR|克隆,关键词：

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     郭军；丁杰；喻召才；李韧；郭长存；樊代明 第四军医大学西京医院消化病研究所 陕西西安710033 第四军医大学学报 2003 1

    关键词：α1；3-半乳糖基转移酶；Galα(1,3)Gal；RT-PCR；克隆

    目的 :构建α1,3 半乳糖基转移酶的重组真核表达质粒 pcDNA3.1/V5 HisAα1,3GT ,为进一步利用其进行胃癌的基因治疗奠定基础 .方法 :从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA ,行RT PCR扩增出编码α1,3 半乳糖基转移酶的全长cDNA ,并克隆入pUCm T测序载体 .经DNA测序证实序列无误后 ,将α1,3 半乳糖基转移酶基因片段亚克隆入pcDNA3.1/V5 HisA真核表达载体 .结果 :经RT PCR扩增出大小约为 1.2kb的基因片段 ,成功克隆入pUCm T载体 .经DNA测序证实为α1,3 半乳糖基转移酶 (α1,3 galactosyl transferase,3GT) ,大小为 12 2 1bp ,编码序列及读框均正确 .经亚...

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