重组人可溶性凋亡素-2配体在Pichia系统中的表达
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王梁华；朱玉平；娄永华；彭燕；冯煜；焦炳华
配体|凋亡素-2|Pichia表达系统|细胞毒,关键词：
参见附件(120kb)。
王梁华；朱玉平；娄永华；彭燕；冯煜；焦炳华 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室；上海200433 第二军医大学学报 2001 3
关键词：配体；凋亡素-2；Pichia表达系统；细胞毒
目的:在甲醇营养型酵母(Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL,凋亡素-2配体)分子。方法:人可溶性TRAIL编码基因片段插入pIC3.5酵母表达载体,氯化锂转化酵母GS115株,甲醇诱导表达5d,SDS-PAGE和Western-blotting确认表达,L929细胞鉴定活性。结果:发现在酵母细胞中重组表达的TRAIL在SDS-PAGE上占总蛋白的50%以上,用抗人TRAIL多抗可以确认表达了TRAIL重组分子,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的TRAIL有明显提高,并能诱导几株肿瘤细胞DNA片段化,说明TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论:在Pichia系统中正确表达了人可溶性TRAIL分子。
关键词：配体；凋亡素-2；Pichia表达系统；细胞毒
目的:在甲醇营养型酵母(Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL,凋亡素-2配体)分子。方法:人可溶性TRAIL编码基因片段插入pIC3.5酵母表达载体,氯化锂转化酵母GS115株,甲醇诱导表达5d,SDS-PAGE和Western-blotting确认表达,L929细胞鉴定活性。结果:发现在酵母细胞中重组表达的TRAIL在SDS-PAGE上占总蛋白的50%以上,用抗人TRAIL多抗可以确认表达了TRAIL重组分子,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的TRAIL有明显提高,并能诱导几株肿瘤细胞DNA片段化,说明TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论:在Pichia系统中正确表达了人可溶性TRAIL分子。
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