微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-α mRNA
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池永斌；吕建新；陆永绥
酶联夹心杂交|聚合酶链反应|肿瘤坏死因子,微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-αmRNA,关键词：
参见附件(46kb)。
池永斌；吕建新；陆永绥 温州医学院检验医学与公共卫生学院 浙江温州325027；细胞与分子医学研究所 中国病理生理杂志 2003 9
关键词：酶联夹心杂交；聚合酶链反应；肿瘤坏死因子
目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术,对人单核细胞分泌的TNF -αmRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针,其中一条为捕获探针,5’端带有氨基修饰,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,而且是“竖直”地包被在微孔内,另一个为检测探针,3’端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA ,RT -PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中,加入检测探针与已杂交的产物结合,最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(avidin -HRP)显色系统催化底物显色,4 5 0nm波长下检测吸光度进行定量。结果:该方法检测TNF -αmRNA ...
关键词：酶联夹心杂交；聚合酶链反应；肿瘤坏死因子
目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术,对人单核细胞分泌的TNF -αmRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针,其中一条为捕获探针,5’端带有氨基修饰,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,而且是“竖直”地包被在微孔内,另一个为检测探针,3’端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA ,RT -PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中,加入检测探针与已杂交的产物结合,最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(avidin -HRP)显色系统催化底物显色,4 5 0nm波长下检测吸光度进行定量。结果:该方法检测TNF -αmRNA ...
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