贲门癌中p16和Rb基因表达的研究

http://www.100md.com 《广东医学》 1999年第5期

华 平 张 华 熊利华 黄洪铮 华 平 张 华 熊利华 黄洪铮 中山医科大学孙逸仙纪念医院胸心外科(510120) 广东医学 1999 0 20 5
关键词：p16蛋白；Rb蛋白；胃肿瘤 期刊 gdyx 0 论著与临床总结 fur -->

摘要： 目的 探讨与细胞周期调节相关的基因p16和Rb基因在贲门癌中的表达及其意义。方法 用SP免疫组化法对58例贲门癌进行p16和Rb基因蛋白的检测。结果 随着贲门癌恶性程度的加重和浸润的加深，p16基因蛋白的阳性表达率逐渐降低，而Rb基因蛋白的阳性表达率逐渐升高(P<0.05)。p16和Rb基因蛋白的表达呈显著负相关(P<0.05)。结论 p16和Rb基因蛋白的表达异常在贲门癌的发生发展中起重要作用。p16基因蛋白对Rb基因蛋白的表达具有负性调节作用。

Study on expression ofp16 and Rb protein in gastric cardia carcinoma

Hua Ping, Zhang Hua, Xiong Lihua, et al.
Department of Cardiothoracic Surgery, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-senUniversity of Medical Sciences, Guangzhou 510120

Abstract Objective To find the expression andsignificance of gene changes which were related to cell-cycle regulator in gastric cardiacarcinoma.Methods The immunohistochemical method (SP) was used to studythe expression of p16 and Rb proteins in 58 cases of gastric cardia carcinoma.Results Forp16, the positive rates decreased with the progression of the pathological grade andinvasion, while for Rb, the positive rates increased (P<0.05). There was an inverserelationship between the expression of p16 and Rb gene protein (P<0.05). Conclusion Theseresults suggest that deletion of p16 and Rb gene protein expression is related withcarcinogenesis of gastric cardia carcinoma, and Rb expression is negatively regulated bythe functional of p16 gene protein.
Key words p16 protein Rb protein Neoplasm, gastric

贲门癌的发病率和病死率近来呈逐年上升的趋势。随着分子生物学的进展，提出了肿瘤的发生是一个多阶段的过程。其基础是原癌基因的激活和(或)抑癌基因的失活，其中肿瘤抑制基因p16和Rb基因与肿瘤发生发展的关系已受到许多学者的重视。我们对贲门癌中p16和Rb基因蛋白的表达进行了检测，力图从分子水平对贲门癌的发生机制进行探讨。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集我院 1992～1997年手术切除的贲门腺癌标本58例。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚度连续切片。按国际抗癌联盟标准进行病理学分级和TNM分期。
1.2 病理分级 58例贲门癌中，病理Ⅰ级12例，Ⅱ级25例，Ⅲ级21例。TNM分期Ⅰ～Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期47例。
1.3 试剂 兔抗人p16多克隆抗体(Dako公司)，兔抗人Rb多克隆抗体(Oncogene公司)，SP免疫组化试剂盒购自福州迈新公司。
1.4 方法 Sp免疫组化染色法按试剂盒说明书进行。用已知阳性切片做阳性对照，PBS(磷酸盐缓冲液)代替一抗做阴性对照。
1.5 统计方法 计数资料用χ² 检验进行统计分析。
2 结果
2.1 贲门癌中p16与Rb基因蛋白表达与病理学分级和TNM分期的关系 p16蛋白阳性表达率随贲门癌病理学分级的加重逐渐降低，而Rb蛋白阳性表达率则随贲门癌病理学分级的加重而逐渐升高，P<0.05。在Ⅰ～Ⅱ期贲门癌中，p16蛋白阳性表达率高于Ⅲ～Ⅳ期贲门癌，而Ⅰ～Ⅱ期贲门癌中Rb蛋白阳性率则明显低于Ⅲ～Ⅳ期，P<0.05。见表1。

表1 贲门癌p16和Rb基因蛋白表达与
病理学分级和TNM分期的关系

2.2 p16和Rb的免疫组化表达相关性 在34例p16基因蛋白阳性表达的贲门癌中，Rb基因蛋白阴性表达18例，而在36例Rb基因蛋白阳性表达的贲门癌中，p16基因蛋白阴性表达20例。经χ² 检验，两者表达呈显著负相关性，P<0.05。
3 讨论
p16基因是近年来发现的一种很重要的抑癌基因，位于人类第9号染色体短臂上(9P21)，编码由148个氨基酸组成，分子量为16kD的蛋白质，对细胞的分裂增生起调节作用^[1，2] 。本组实验结果显示，随着贲门癌恶性程度的加重，p16基因蛋白的阳性表达率明显下降，恶性程度低的贲门癌p16阳性率明显高于恶性程度高的贲门癌，而且在临床分期资料中也发现，浸润深或较晚期的贲门癌p16阳性表达率明显低于浸润浅或较早期的贲门癌。这说明p16基因蛋白低表达是贲门癌较晚期的表现。
Rb基因定位于13号染色体短臂上，它作为一个信号转换器将细胞周期与转录机制相联系^[3] 。本组实验结果显示，Rb基因蛋白的表达与贲门癌的恶性程度及临床分期有密切关系。随着贲门癌恶性程度的加重和浸润的加深，Rb的阳性表达率逐渐升高。
分子生物学研究发现，细胞周期的正常演进依赖于周期蛋白和其抑制蛋白的调节而完成^[4] 。p16基因是直接控制细胞增殖周期的固有基因，它与Rb基因都能控制细胞的G₁ 期→S期的转换，Rb基因的去磷酸化产物(Rb蛋白)可阻止细胞进入S期，细胞周期蛋白D与CDK₄ 形成的复合物可介导Rb磷酸化，而p16基因则可抑制该复合物形成，从而抑制Rb的磷酸化，阻止细胞由G₁ 期进入S期，从而抑制细胞的增殖。
贲门癌中p16和Rb基因变化的相互关系尚不十分清楚。本实验结果表明p16与Rb基因蛋白存在明显的负相关性。Rb的表达受p16基因蛋白的负性调节，两者之间存在一个负性反馈通路，这说明贲门癌的分子发生机制可能涉及该调节通路的障碍。
我们的实验结果提示p16和Rb基因蛋白的表达异常在贲门癌的发生发展中起重要作用，但阐明其确切分子学机理仍有待更进一步的研究。

参考文献

1 Caldas C, Hahn SA, da Costa LT, et al. Frequent somaticmutations and homozygous deletions of the p16 (MTS1) gene in pancreatic adenocarcinomas.Nature Genet, 1994, 8:27
2 Kamb A, Gruis NA, Weaver-feldaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involvedin genesis of many tumor types. Science, 1994, 264:436
3 Xu HJ, Cairns P, Hu SX, et al. Loss of Rb protein expression in primary bladder cancercorrelates with loss of heterozygosity at the Rb locus and tumor progression. Int JCancer, 1993, 53:781
4 Serrano M, Hannon CJ, Beach D, et al. A new regulatory motify in cell cycle controlcausing specific inhibition of Cyclin D/cdk4. Nature (Lond), 1993, 366:703 , http://www.100md.com

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/DirDu/2005/07/03/68/02/99.htm