心脉安颗粒剂质量标准研究

http://www.100md.com 《中药新药与临床药理》 1999年第4期

洪 馨 宓穗卿 广州中医药大学临床药理研究所，广州510405 中药新药与临床药理 1999 0 10 4
关键词：@心脉安颗粒剂/化学；甘草酸/分析；高效液相色谱法；薄层色谱法 期刊 zyxyylcyl 0 质量分析研究 fur -->

摘要： 对心脉安颗粒剂中炙甘草、人参、桂枝、生姜进行了薄层鉴别，并应用高效液相色谱法对炙甘草中的甘草酸进行了含量测定，方法灵敏，重现性好，加样回收率为99.7%，RSD为1.12%。
中图分类号：R284.1
文献标识码：A 文章编号：1003-9783(1999)04-0228-04

The Standard of Quality Control for Xinmaian Granule

Hong Xin,Mi Sui Qing
(Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 51040 5)

Abstract: In this study,Radix Ginseng,Radix Glycyrrhizae Prepar atae ,Ramulus Cinn amomi and Rhizoma Zingiberis Recens in Xinmaian Granule were ide ntified by TLC,and the content of Glycyrrhizic acid was analyzed quantitatively by HPLC.The results showed that the recovery ratio is 99.7% and the RSD is 1.12%(n=6).The method is found to be highly sensitive and reproducible,and may be used as a standard of the quality control for this compound preparation.
Keywords: @Xinmaian Granule/chem.;Glycy rrhizic acid/analysis;HPLC;TLC scanner

心脉安颗粒剂是由《伤寒论》第 117条炙甘草汤改进研制而成的中药抗心律失常的新制剂。由炙甘草、人参、桂枝、生姜、生地等多味中药组成，具有养血滋阴，补益肺气之功效。主要用于治疗冠心病引起的心律失常。本文对方中君药炙甘草，臣药人参、桂枝、生姜进行了薄层鉴别研究，并应用高效液相色谱法对炙甘草的主要成分甘草酸进行定量测定。结果灵敏度高，重现性好，操作简便，可作为心脉颗粒剂的质控标准。

1 实验部分

1.1 仪器、试药及样品
Waters高效液相色谱仪，配有 510泵， 486可调节紫外检测器， U6K进样器， 810色谱工作站；电子分析天平 (日本岛津公司 )；超声波清洗器 (上海超声波仪器厂 )； SPU— 1型自动喷雾器 (日本岛津公司 )；定量毛细管 (DrummondScientificUSA)；手工涂布器 (陕西前进鼓风机械厂 )；硅胶 G(德国 MERCK公司 )；其他试剂均为分析纯。
甘草酸单铵盐、人参皂甙 R_g1 、 R_e 、桂皮醛对照品 (中国药品生物制品检定所 )；炙甘草、生姜对照药材购自广东省药材公司；心脉安颗粒剂及阴性对照品均由第一军医大学药剂教研室提供。
1.2 鉴别
1.2.1 炙甘草、人参^{[ 1]}
(1)供试品溶液的制备 取本品粉末 5g,加氯仿 40mL，超声处理 20min，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇 50mL，超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至约 5mL，加于已处理好的中性氧化铝柱 (100～ 120目， 15g，内径 10～ 15mm)上，用 40%甲醇 150mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水 30mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取 2次，每次 25mL，合并提取液，用氨水洗涤 3次，每次 20mL，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，使成 1mL，作为供试品溶液。
(2)对照品及对照药材溶液的制备 取炙甘草对照药材 1g,同法制成对照药材溶液。另取人参皂甙 R_g1 、 R_e 对照品，加甲醇制成 1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
(3)阴性对照液的制备 分别取缺炙甘草、人参的阴性对照品 5g，按供试品溶液制备项下的方法制得阴性对照液。
(4)薄层层析 分别依次吸取上述 5种溶液 8、 4、 2、 4、 4μ L，点样于同一硅胶 G薄层板上，以氯仿 -乙酸乙酯 -甲醇 -水 (15∶ 40∶ 22∶ 10)10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中在与炙甘草对照药材相应位置上显相同的黄色斑点；在与人参皂甙 R_g1 、 R_e 对照品色谱相应的位置上显相同的紫色斑点，阴性对照品均无干扰，见图 1。

图1 炙甘草、人参薄层色谱图

1.炙甘草 2.缺炙甘草阴性对照 3.样品
4.人参皂甙R_g1 (上)、R_e (下) 5.缺人参阴性对照

1.2.2 生姜^{[ 2]}
(1)供试品溶液的制备 取本品粉末 5g，加 50%甲醇 60mL，超声提取 30min，过滤，滤液浓缩至干，加正已烷 10mL，超声提取 5min，过滤，滤液浓缩至干，残渣加正己烷溶解，使成 1mL，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备 取生姜对照药材 3g，加水 50mL煎煮 30min，过滤，滤液浓缩至干，加乙醚 50mL振摇 30min，过滤，滤液浓缩至干，按供试品溶液制备项下方法操作，制得对照药材溶液。
(3)阴性对照品溶液的制备 取缺生姜的阴性对照样品，按供试品溶液制备项下方法操作，制得阴性对照品溶液。
(4)薄层层析 吸取上述三种溶液各 20μ l，点样于同一硅胶 G薄层板上，以苯 -甲酸 -乙酸乙酯 (9∶ 0.5∶ 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在 105℃烘至斑点显色清晰。在日光下检视，供试品色谱中在与对照药材相应位置上显相同的蓝紫色斑点，阴性对照品无干扰，见图 2。
1.2.3 桂枝^{[ 1]}
(1)供试品溶液的制备 取本品粉末 8g，加乙醚 20mL，振摇 15min，放置 1h，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加乙醚溶解，使成 1mL，作为供试品溶液。

图2 生姜薄层色谱图

1.生姜 2、3.样品 4.缺生姜阴性对照

(2)对照品溶液的制备 取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1mL含2μL的溶液，作为对照品溶液。
(3)阴性对照品溶液的制备 取缺桂枝的阴性样品，按供试品溶液制备项下方法操作，制得阴性对照品溶液。
(4)薄层层析 分别吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各12μL，对照品溶液2μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)—乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼溶液。在日光下检视，供试品色谱中在与对照药材相应位置上显相同的橙黄色斑点，阴性对照品无干扰，见图3。

图3 桂枝薄层色谱图

1.桂皮醛 2、3.样品 4.缺桂枝阴性对照

1.3 含量测定
1.3.1 色谱条件 SperisorbC18柱 (4.6×250mm110μ m)， G(4)-ODS保护柱；流动相：甲醇 -0.2%冰醋酸 (70∶ 30)；流速： 1.0mL/min；检测波长： 249nm；柱温： 35℃；灵敏度： 0.01AUFS。在此色谱条件下，样品中甘草酸与相邻的峰已达到基线分离 (图中色谱峰 a)，且阴性对照品在相应的位置无干扰，见图 4。

图4 心脉安颗粒剂HPLC图谱

1.3.2 标准曲线的制备 精密称取甘草酸单铵盐对照品 10.0mg，用甲醇溶解，定容至 10mL，作为对照品储备液 (浓度为 1mg/mL)。精密吸取上述溶液 1.0mL，置 10mL量瓶中，定容至刻度，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液 1， 2， 4， 6， 8， 10， 12μ L注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，得回归方程为： Y=60705X-185， r=0.9998。实验结果表明，进样量在 0.10～ 1.20μ g之间呈良好的线性关系。
1.3.3 稳定性试验 精密吸取上述对照品溶液 6.0μ L，每隔一定时间注入液相色谱仪中测定，共测 30h，测得峰面积积分值为 361715， 371865， 357013， 358007， 361734， RSD=1.62%。
1.3.4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液 5.0μ l，连续重复进样 7次，测得峰面积积分值为 313715， 310228， 309837， 310923， 312545， 314397， 313865， RSD=0.60%。
1.3.5 样品测定 取心脉安颗粒剂约 1.1g，精密称定，置 5mL容量瓶中，加 50%甲醇适量，超声提取 30min，加 50%甲醇至刻度，用滤纸初滤，再用 0.45μ m微孔滤膜复滤，弃去初滤液，收集续滤液作为供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表 1。

表1 样品含量测定结果(n=3)

1.3.6 加样回收率试验 取已知含量样品6份，每份约0.3g，各加入甘草酸单铵盐对照品储备液(1.0mg/mL)1.0mL。按上述供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表2。

表2 回收率试验结果

平均加样回收率=99.7% RSD=1.12%(n=6)

2 讨论

2.1 炙甘草、人参薄层鉴别： 在本薄层条件下可同时检出人参、甘草，但甘草酸无法检出，故选用炙甘草药材进行薄层对照。样品用中性氧化铝小柱处理后，消除了提取物中其它成分的干扰，正丁醇提取液用氨水洗涤后，可减少斑点的拖尾。
2.2 有关甘草酸的含量测定方法已有报道，如薄层扫描法^[3] ，高效液相色谱法^[4] 等，本文采用高效液相色谱法测定心脉安颗粒剂中甘草酸的含量，方法简便、快速、准确度好、精密度高，可作为该制剂的质控方法。其中样品前处理曾分别用纯甲醇和50%甲醇进行超声提取，结果表明，用50%甲醇提取效果较前者为好；本文采用甘草酸单铵盐对照品，计算样品中甘草酸的含量，因制备高纯度的甘草酸较困难，而在酸性条件下，甘草酸与甘酸单铵盐的出峰时间一致，不影响样品中甘草酸的定量。

基金项目：国家中医药管理局重点资助课题

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中药薄层色谱彩色图集[S].广州：广东科技出版社，1993.122，132.
[2]王宝(王王)/(木).中成药质量标准与标准物质研究[S].北京：中国医药科技出版社，1994.421.
[3]李祥，许剑峰，窦志华，等.白虎汤液中活性成分的研究[J].中成药，1991，13(2)：32.
[4]肖元祥，胡志厚，冯韧韧，等.高效液相色谱法测定甘草及人丹中甘草酸的含量[J].中成药，1990，12(7)：12.

收稿日期：1999-01-08 , 百拇医药

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/DirDu/2005/07/03/68/18/88.htm