【摘要】 目的 以绿色荧光蛋白(Greenfluorescence protein, GFP)为报告基因，构建纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogenactivator inhibitor-1，PAI-1)与GFP融合基因的真核表达质粒，在活细胞状态下观察PAI-1/GFP融合蛋白在大鼠系膜细胞中表达。方法 利用聚合酶链反应(PCR)技术，从含有编码人类PAI-1(hPAI-1)全长cDNA序列的质粒pUC19-PAI-1中扩增出hPAI-1的编码区全长cDNA序列，定向克隆至真核表达载体pCMX-GFP。利用脂质体为转染载体，将表达质粒转染至体外培养的大鼠系膜细胞。利用Northern杂交、Western印迹、荧光显微镜直接观察以及纤维蛋白平板等方法检测PAI-1/GFP融合基因在大鼠系膜细胞的表达。结果 转染组大鼠系膜细胞PAI-1 mRNA表达、细胞培养上清PAI-1活性均较对照组明显增高。大鼠系膜细胞表达的融合蛋白PAI-1/GFP对尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)有明显的抑制活性，并能在荧光显微镜下激发绿色荧光。脂质体可以明显提高转染效率，24小时转染阳性细胞比例最高(33%±5.24%)，与磷酸钙法(18%±3.21%)相比明显增高(P<0.05)。其蛋白质表达从转染8小时后开始，24～48小时达到最高 ......