c-myb基因反义寡核苷酸对K562细胞作用的研究

http://www.100md.com 《中华血液学杂志》 1999年第7期

     石奇珍吕联煌 350001福州，福建省血液病研究所、福建医科大学附属协和医院中华血液学杂志 1999 0 20 7

    关键词： 期刊 zhxyxzz 0 研究报告 fur -->

为研究慢性髓细胞白血病(CML)反义核酸的治疗效果，我们以CML细胞株K562为实验对象，研究c-myb基因硫代磷酸反义寡聚脱氧核苷酸对K562细胞的作用，现将结果报告如下。

    材料和方法

    1 细胞株 K562细胞由福建省医学科学研究所提供。培养条件：含体积分数为15%灭活胎牛血清(Gibco)及50IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养液(pH7.2～7.4)，置37℃、体积分数为5%CO2、完全饱和湿度培养箱中培养。

    2 反义寡核苷酸的合成 反义寡聚脱氧核苷酸是由本所合成，为防核酸酶降解，采用二硫化四乙基秋兰姆(tetraethylthiuramclisulfide,TETD)加以修饰，形成硫代磷酸反义寡聚脱氧核苷酸，经OPC柱纯化、冷冻干燥后用RPMI1640培养液配制成浓度为0.35μmol/L备用。c-myb基因反义寡聚脱氧核苷酸的序列是根据人c-myb基因cDNA序列设计，同时设计c-myb基因正义寡聚脱氧核苷酸为对照。其序列见表1。

表1 反义寡核苷酸及引物的序列

引物	序列(5'→3')
c-myb基因
密码子2～7：正义	GCCCGAAGACCCCGGCAC
密码子2～7：反义	GTGCCGGGGTCTTCGGGC
β-actinmRNA引物A	GTGGGGCGCCCCAGGCACCA
β-actinmRNA引物B	CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC
abl引物	GGCTTCACTCAGACCCTGAGG
bcr引物	AGGGTGCACAGCCGCAACGGC

3 反义寡核苷酸与细胞共培养 取对数生长期的细胞调成浓度为104/ml ......

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