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编号:10649772
病毒性肝炎肝组织P16蛋白的表达及其意义
http://www.100md.com 《中华实验和临床病毒学杂志》 1998年第2期
病毒性肝炎肝组织P16蛋白的表达及其意义

辛绍杰 王林杰 王松山 陈黎明 100039 北京 解放军302医院 中华实验和临床病毒学杂志 1998 6 12 2
关键词:病毒性肝炎;p16蛋白 期刊 zhsyhlcbdxzz 0 论著 fur -->
【摘要】 目的 了解病毒性肝炎肝组织中P16的表达及其意义。方法 对48例病毒性肝炎、7例原发性肝癌病人肝组织进行了P16免疫组化研究。结果 P16蛋白在慢性肝炎轻、中度的阳性率分别为85.00%和91.66%,而在慢性肝炎重度的阳性率仅为50.00%,肝硬变慢性重型肝炎、原发性肝癌中没有表达,慢性肝炎轻、中度的阳性率均明显高于肝硬变慢性重型肝炎、原发性肝癌的阳性率(P<0.01,0.001),进一步证明肝硬变是原发性肝癌的癌前病变。与病原学关系表明,P16在乙型肝炎中表达的阳性率为77.14%,明显高于在丙型肝炎中的表达(P<0.001)。结论 丙型肝炎更易导致原发性肝癌的发生。

Study on expression of P16 protein in the liver tissue of viral hepatitis Xin Shaojie, Wang Linjie,Wang Songshan,et al.The 302 Hospital of PLA,Beijing 100039
Abstract P16 protein is a cell cycle regulator involved in the genesis of many types of tumors. In order to study the signifi cance and expression of P16 protein in liver tissue of viral hepatitis,48 patients with viral hepatitis and 7 cases with hepatocarcinoma were investigated by immunohistochemistry.The results showed that the positive rate of P16 protein expressed in the liver tissues of mild (85.0%) and moderate (91.66%)chronic viral hepatitis were significently higher than that in liver cirrhosis and hepatocarcinoma (P<0.01,0.001). this suggess that the expression of P16 plays an important role in the carcinogenesis.
Key words: Viral hepatitis P16 protein

P16是近年发现的一种抑癌基因,虽然文献中有关P16基因缺失的检测较多,但有关其产物P16蛋白的检测报道极少。肝炎病毒与原发性肝癌的发生密切相关,为了解病毒性肝炎肝组织中P16的表达及其意义,我们对48例病毒性肝炎、7例原发性肝癌病人肝组织进行了免疫组化研究。

1 材料和方法
1.1 研究对象及诊断标准 55例患者中男性46例,女性9例,年龄15~64岁,均为我院住院患者。病毒性肝炎患者中急性肝炎2例,慢性肝炎40例(轻度20例,中度12例,重度8例),肝硬变慢性重型肝炎6例。原发性肝癌7例。肝硬变慢性重型肝炎、原发性肝癌患者均为302医院住院死亡尸检病理证实患者。符合1995年北京全国传染病学和寄生虫病学学术会议修订的诊断标准。病原学诊断:甲型肝炎2例,乙型肝炎35例,丙型肝炎10例,甲乙重叠3例,乙丙重叠5例。肝组织标本,福尔马林固定,石蜡包埋。
1.2 主要试剂 兔抗人P16蛋白多克隆抗体购自中山生物技术有限公司(美国Santa Cruz公司产品),工作浓度为1:100。ABC免疫组化试剂盒购自华美生物工程公司。
1.3 免疫组化方法 采用ABC法,DAB显色。阴性对照片以PBS代替一抗。
1.4 统计学分析 χ2 检验,理论数小于5者行连续性校正。

2 结果
2.1 P16蛋白在病毒性肝炎肝组织表达特点 P16阳性物质呈棕红色,质地细腻均匀,多为细胞核阳性,或细胞核细胞浆同时阳性,少数为细胞浆阳性,也可见到血窦壁及枯否细胞阳性或核和血窦壁同时阳性,偶可见到细胞膜阳性。见图版Ⅰ。细胞核阳性细胞整个细胞核均匀着色;胞浆阳性细胞呈片状,覆盖整个细胞浆或胞浆大部分;胞膜阳性细胞阳性物质沿胞膜呈性状;枯否氏细胞阳性细胞,核不着色。阳性细胞周围无炎细胞浸润及坏死等。

表 1 肝组织P16蛋白表达与病理诊断的关系
Tab.1 Relationship between the P16 protein expression in liver tissue and the pathology
病理诊断
Pathological
diagnosis
例数
Cases
P16蛋白表达
Expression of P16 protein
- + ++ +++ 阳性率
Positive
rate
(%)
急性肝炎
Acute hepatitis
2 1 1 0 0 50.00
慢性肝炎
Chronic hepatitis
轻度
Mild
20 3 7 4 6 85.00
中度
Moderate
12 1 5 3 3 91.66
重度
Severe
8 4 3 0 1 50.00
肝硬变慢性
重型肝炎
Liver cirrhosis &
chronic severe
hepatitis
6 6 0 0 0 0.00
原发性肝癌
Hepatocellular
carcinoma
7 7 0 0 0 0.00
合计
Total
55 22 16 7 10 60.00

2.2 肝组织P16蛋白的表达与病理诊断关系 表1结果表明,P16蛋白在慢性肝炎的表达较为明显,慢性肝炎轻、中、重度的阳性率分别为85.0%、91.66%、50.00%;而在肝硬变慢性重型肝炎、原发性肝癌中没有表达;慢性肝炎轻、中度的阳性率均明显高于肝硬变慢性重型肝炎、原发性肝癌的阳性率,χ2 值为9.282和11.217,P<0.01,0.001。慢性肝炎轻、中、重度间无明显差异。


表 2 肝组织P16蛋白表达与病原学诊断的关系
Tab.2 Relationship between the p16 protein expression in liver tissue and the etiology
病原学诊断
Etiology
例数
Cases
P16蛋白表达
Expression of P16 protein
阳性率%
Positive
rate
- + ++ +++
HAV 2 1 1 0 0 50.00
HBV 35 8 11 6 10 77.14
HCV 10 8 2 0 0 20.00
HAV+HBV 3 2 1 0 0 33.33
HBV+HCV 5 3 1 1 0 40.00
合计
Total
55 22 15 7 10 60.00
2.3 肝组织P16蛋白的表达与病原学关系 由表2可见,在乙型肝炎肝组织中P16的表达较为明显,阳性率为77.14%,明显高于在丙型肝炎中的表达(χ2 =11.084,P<0.001)。而其他各组间无明显差异。

3 讨论
P16是近年发现的一种抑癌基因,定位于人类第9号染色体短臂上(9P21),编码一个由148个氨基酸组成,分子量约为16?000的蛋白质。正常情况下,P16蛋白通过与细胞周期关键酶周期素依赖性激酶4(cdk4)结合,拮抗cdk4的作用,从而阻止细胞由G1期进入S期(DNA合成期),使细胞增殖受阻。在大多数肿瘤中已发现有P16基因的突变和缺失,说明P16基因功能的失活和缺乏可导致肿瘤细胞的无限性生长,因此与肿瘤的起因和恶化有关,其重要性不亚于P53和RB肿瘤抑制基因[1,2] 。有人对胰腺癌的检测发现,有P16基因缺失的胰腺癌组织均未见P16蛋白表达[3] ,表明P16蛋白表达阴性代表P16基因缺失。目前原发性肝癌的发生机制尚不十分清楚,乙型肝炎及丙型肝炎病毒与原发性肝癌的发生有密切关系,为了解P16在病毒性肝炎及原发性肝癌肝组织中的表达及其意义,我们对48例病毒性肝炎、7例原发性肝癌病人肝组织进行了免疫组化研究,结果表明,P16蛋白在轻、中度慢性肝炎的表达较为明显,阳性率分别为85.00%和91.66%;而在重度慢性肝炎阳性率仅为50.00%;肝硬变慢性重型肝炎、原发性肝癌中没有表达。慢性肝炎轻、中度的阳性率均明显高于慢性重型肝炎、原发性肝癌的阳性率,P<0.01,P<0.001。慢性肝炎轻、中、重度间无明显差异。与病原学关系研究表明,P16在乙型肝炎中的表达较为明显,阳性率为77.14%,明显高于在丙型肝炎中的表达(P<0.001)。提示丙型肝炎与原发性肝癌的关系较乙型肝炎更为密切,更易导致原发性肝癌的发生。
研究表明,5%~25%的肝硬变患者发生肝癌,且大多数肝癌患者的癌旁组织都有肝硬变的改变。肝硬变的肝细胞再生结节常常有肝细胞异常增生和非典型增生,故肝硬变被认为是原发性肝癌的癌前病变[4] ,但其发生机制尚不清楚。本结果证明,50%的重度慢性肝炎(肝硬变)、100%的肝硬变慢性重型肝炎患者肝组织P16蛋白表达阴性,表明存在着P16基因功能的失活和缺乏,失去了拮抗cdk4的作用,引起肝细胞的异常增生和非典型增生,进而导致原发性肝癌的发生。

参 考 文 献

1 陆哲明.P16抑癌基因的发现及研究.国外医学肿瘤学分册,1995,6:321-223.
2 李楠.P16基因与肿瘤.国外医学肿瘤学分册,1995,5:257.
3 胡颖川,赵坡,王景艳,等.P16蛋白在胰腺癌中表达的研究.中华医学会病理学会第六次全国学术会议,天津,1995,9,15.
4 王洛权,阚秀,吴秉铨.肝炎病毒与肝癌癌变的分子病理学进展.中华病理学杂志,1995,6:393-395.
1996年10月4日收稿 12月4日修回
, 百拇医药