【摘要】 目的 纯化重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶(HIV-1 RT)，筛选新的HIV-1 RT抑制剂。方法 在适宜的培养条件下诱导工程菌E.coli JM109(PKRT2)可高效表达重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)逆转录酶(RT)。应用DEAE-纤维素和磷酸纤维素离子交换柱层析法从细菌裂解液中分离、纯化重组RT。结果 1升细菌培养液可得到1.1mg产物。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示所纯化的重组RT为由两个分子量分别为66kD和51kD的亚基组成的杂二聚体。酶活性测定结果表明，经纯化的重组RT具有很高的逆转录酶活性(比活力为1.4×10⁴ u/mg)。结论 本文通过对RT反应条件的研究，优化了RT反应系统，并测定了磷甲酸钠(PFA)对重组RT的抑制效应，结果表明PFA对重组RT的抑制反应动力学机制与天然RT相同，从而进一步说明用此法纯化的重组RT可直接用于抗HIV药物的筛选与评价。

    The study on purification and characterization of HIV-1 reverse transcriptase from a recombinant strain of E.coli Jia Hongwei,Tao Peizhen.Institute of Medicinal Biotechnology,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Beijing 100050

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