狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞中的复制周期的观察
关键词:
病毒的复制过程是很复杂的。研究病毒的复制过程是大多数实验病毒学家关注的焦点〔1〕 ,这对病毒的致病性、潜伏期、病毒的诊断、疫苗生产中毒种接种量、培养时间、收获时间都非常重要。我们对CTN-1毒株在Vero细胞中感染、吸附和复制周期进行了初步研究。
1 材料和方法
将分离自我国济南并已适应于Vero细胞的CTN-1毒株〔2,3〕 接种Vero细胞,观察其吸附以及复制情况〔4〕 。首先制备实验用毒种,并以半微量蚀斑形成法正确滴定其滴度,方法按文献〔5〕。CTN-1对Vero细胞吸附时间的确定和复制周期的确定是将经蚀斑法精确滴定的病毒液与经精确计数的感染的靶细胞(Vero细胞)进行稀释调整至1.0MOI和0.1MOI两种感染比例,一经病毒液与细胞液混匀接触即开始计时为零分钟,依次分别在0、10、20、30、45和60分钟时取样迅速离心,上清液于-70℃冻存,以备测定吸附后的残留病毒量;已吸附病毒的细胞离心沉淀再用培养液离心沉淀洗3次,继续培养至7天后测定病毒滴度,以证实细胞已吸附病毒。
病毒与Vero细胞经37℃吸附半小时,去掉残存的上清病毒液,细胞用MEM培养基洗涤3次,最后加入3%牛血清的MEM培养基分装小管,置37℃培养,分别经半小时、1、2......直至7天共23个时间点取样,每次取一小管,取样后上清液作为细胞外分泌病毒样品存于-70℃;细胞经MEM洗涤3次 ......
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