肝癌组织及血清中细胞间粘附分子-1表达的研究

http://www.100md.com 《中华肝脏病杂志》 1998年第4期

孙婧景 周信达 冯久贤 刘银坤 周铬 汤钊猷 200032 上海医科大学中山医院肝癌研究所(孙婧景、周信达、刘银刊、周铬、汤钊猷)；上海市胸科医院肺癌研究室(冯久贤) 中华肝脏病杂志 1998 0 0 4
关键词：肝癌 肿瘤转移 细胞间粘附分子-1 期刊 zhgzbzz 0 临床研究 fur -->

【摘要】 目的 研究细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)作为判断肝癌发展程度及转移状态指标的可能性。方法 以免疫组化的方法检测ICAM-1在肝癌组织和正常肝组织中的表达，观察了ICAM-1表达在细胞的定位。以点免疫印迹法测定不同患者血清和不同肝组织中ICAM-1的表达。分析ICAM-1表达与肿瘤生长转移状态、肿瘤特性的关系。结果 肝癌细胞ICAM-1表达阳性(阳性率为80.0%)，主要分布在细胞膜，正常肝细胞则为阴性。肝癌患者血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平高于正常人(P<0.01)及肝良性肿瘤患者(P<0.05)，肝癌伴转移者高于无转移者(P<0.05)。肝癌组织中ICAM-1含量明显高于癌旁组织(P<0.01)及正常肝组织(P<0.01)，而与肿瘤大小及有无包膜无关(P>0.05)；转移组肝癌中ICAM-1的表达明显高于非转移组(P<0.05)，两组癌旁组织中ICAM-1表达无差别(P>0.05)。结论 血清及组织中ICAM-1的水平在一定程度上可以反映肝癌发展程度及转移状态，有可能作为预测肝癌转移复发的指标。

STUDY ON THE RELATIONSHIP BETWEENINTERCELLULAR ADHESION MOLECULE-1 AND LIVER CANCER METASTASIS Sun Jingjing, Zhou Xinda, Feng Jiuxian, et al. Liver Cancer Institute Zhongshan Hospital, Shanghai MedicalUniversity, Shanghai 200032
【Abstract】 Objective To study the relationship betweenintercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and liver cancer metastasis and to search anindex that can reflect the growth and the metastasis of liver cancer. Methods ICAM-1 expression in fresh tissue of normal liver and liver cancer was examined byimmunoperoxidase staining. Serum soluble intercellular adhesion molecule-1 (sICAM-1) frompatients with liver cancer, benign tumor and normal control, and the expression of ICAM-1in hepatoma, tumor surrounding liver and normal liver were semi-quantitatively analyzed byDot immuno-blot. Results The expression of ICAM-1 was positive (80.0%,36/45) in the cell of hepatoma, meanwhile was negative in normal. SICAM-1 content was thehighest in patients with liver cancer comparing with that in patients with benign tumor(P<0.05) or normal control(P<0.01), and was higher in patients with metastasis thanthose without metastasis (P<0.05). Tissue ICAM-1 was higher in liver cancer than intumor surrounding liver (P<0.01) and in normal tissue (P<0.01), and was also higherin liver cancer with metastasis than in liver cancer without metastasis(P>0.05). Conclusion ICAM-1 could be a marker of the stage and metastasis of liver cancer and may play a rolein the biological character of hepatoma cell.
【Key words 】 Liver cancer Tumor metastasis Intercellularadhesion molecule-1

肝癌的侵袭转移是术后复发和影响预后的主要原因之一，与细胞间异嗜粘附有关的细胞间粘附分子-1(intercellularadhesion molecule-1, ICAM-1)在此过程中起重要作用[1]。

资料与方法

一、临床资料
1. 用于免疫组化ICAM-1测定的组织标本来自1996年8月～1997年6月间在上海医科大学中山医院手术的患者51例，经病理证实为肝细胞癌45例。有转移组(门静脉有癌栓或肝内有转移灶)22例，无转移组23例。正常组6例，取经病理证实为肝良性肿瘤周围无硬化的肝组织。
2.用于血清中ICAM-1测定的患者为1996年8月～10月间的住院者共39例。肝癌33例，31例经术后病理证实为原发性肝细胞癌，2例临床诊断为原发性肝癌。肝良性肿瘤6例，其中肝血管瘤4例，肝腺瘤1例，肝囊肿1例，均经病理证实。正常对照组36例，为体检中肝功能和肝脏B超检查均正常者。
3.用于组织中ICAM-1测定的患者为1995年8月～1996年10月在中山医院行手术治疗者48例，肝癌40例，均经病理证实为原发性肝细胞癌，其中转移组16例，非转移组24例。正常肝8例，取自经病理证实为肝良性肿瘤周围无硬化的肝组织。
二、实验材料
ICAM-1单抗抗体购于英国R&D公司，浓度为1 g/L。ALP标记的兔抗鼠IgG购于华美公司。生物素标记的羊抗鼠IgG,ABC试剂盒购于Vector公司。MIAS-300全自动图像分析仪(四川大学生产)。
三、实验方法
1.免疫组织化学方法：样本切片经空气干燥后丙酮固定，马血清封闭，ICAM-1单抗抗体(1∶50)过夜，PBS冲洗，生物素标记的二抗抗体(1∶200)37℃1h，加入等量混合的亲合素与生物素-辣根过氧化物的混合物(1∶100)，DAB显色，苏木素复染。
2.点免疫印迹法(Dot immuno-blot)： 患者入院后于术前空腹采静脉血2ml，取血清置-70℃保存待测。手术切除的新鲜肝癌标本快速液氮(-196℃)冷冻后置-70℃保存。测量前取组织块约0.6cm×0.6cm×0.6cm大小，以含1%TritonX-100悬浮缓冲液1.5ml进行组织匀浆，离心取上清液。将血清50ml及组织匀浆上清液30ml点到硝酸纤维素膜上，以生理盐水为对照。5%脱脂奶粉封闭，PBS洗膜，ICAM-1单抗抗体1∶500室温孵育2h，二抗抗体1∶200室温孵育2h，显色剂显色。结果由上海医科大学图像分析中心采用MIAS-300全自动图像分析仪分析，ICAM-1采用相对定量。即sICAM-1量＝(样品灰度-本底灰度)×样品面积，组织ICAM-1量＝(样品灰度-本底灰度)×样品面积/蛋白含量。
四、统计学处理
计数资料采用卡方检验。计量资料采用两组样本的t检验，数据呈正态分布时直接运算，非正态分布时先行对数转换后再运算。

结 果

一、肝组织中ICAM-1的免疫组化染色
正常肝细胞未见阳性染色颗粒。肝癌组织中ICAM-1阳性表达主要位于细胞膜，镜下呈蜂窝状，肝癌组织总阳性率为80.0%(36/45)，“+”(阳性细胞数0～30%)为58.3%(21/36)，“++”(阳性细胞数30%～70%)为41.7%。癌栓组织ICAM-1表达强阳性。大肝癌、有包膜、转移组阳性细胞率较高，但在统计学上差异没有显著性(P均>0.05)。
二、各组血清可溶性ICAM-1(sICAM-1)的半定量测定结果
肝癌患者血清sICAM-1含量约是正常人的3.5倍，是良性肿瘤患者的2.24倍。sICAM-1含量与肝癌转移与否有关，而与包膜有无及肿瘤大小无关(表1)。

表1 各组sICAM-1含量[()/100]

*与肝癌组织相比P<0.01

表2 各组组织中ICAM-1含量[()/1000]

*与肝癌组织相比P<0.01

三、肝癌组织、癌旁肝组织与正常肝组织中ICAM-1含量
表2所示，肝癌组织中的ICAM-1含量高于正常肝组织和癌旁肝组织，癌旁肝组织与正常肝组织中含量相近。肝癌组织中ICAM-1含量仅与肝癌是否转移有关，而与有无包膜及肿瘤大小无关。
讨 论
ICAM-1表达在正常肝组织为阴性。45例肝细胞肝癌中36例为阳性，ICAM-1主要分布于细胞膜上，2例癌栓组织ICAM-1均为阳性(++)。肝癌患者sICAM-1显著高于正常人(P<0.01)和良性肿瘤患者(P<0.05)，正常人与良性肿瘤患者相比含量无差别(P>0.05)，可见sICAM-1可反映患者的带瘤状态。肝癌组织中ICAM-1的含量明显高于正常肝组织(P<0.01)与癌旁组织(P<0.01)，说明ICAM-1的变化是肝癌组织有别于其它肝组织的特征性变化，可能与肝癌细胞的生长转归有直接关系。转移组与非转移组相比肝癌组织及血清中ICAM-1含量均明显增加，提示ICAM-1含量可反映肝癌患者的转移复发状态，癌旁组织中ICAM-1含量两组无差别，因此与ICAM-1有关的转移特性主要取决于肝癌细胞，而与癌旁肝组织关系不大。
血清和肝癌组织中ICAM-1含量均与肿瘤大小及肿瘤有无包膜无关，故认为组织和血清中ICAM-1的表达与患者是否带瘤有关，与肿瘤转移状态有关，与肿瘤特性关系不大。结果提示：细胞膜上ICAM-1的表达与肝癌细胞有别于正常肝细胞的生物学特性有关，肝癌患者组织和血清中ICAM-1的检测一定程度上可以反映肝肿瘤的恶性程度及肝癌细胞的侵袭转移能力，据此可以把它做为判断肝肿瘤发展程度及转移状态的一个推测指标。
本课题受国家自然科学基金(396706)、国家“九五”攻关课题基金(96-906-01-15)、美国中华医学基金会(CMB93-583)资助

参 考 文 献

1 Tsujisaki M, Imai K, Hirata Y, et al. Detection of circulatingintercellular adhesion molecule-1 antigen in malignant disease. Clin Exp Immunol, 1991,85: 3-8.

(收稿：1997-11-25 修回：1998-03-10)
(本文编辑：何亚玲 校对：袁平戈) , 百拇医药

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