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编号:10651513
骨巨细胞瘤GCF-5抗原的cDNA克隆化及其在大肠杆菌中的表达
http://www.100md.com 《中华骨科杂志》 1999年第1期
巨细胞瘤|骨|抗体|单克隆|克隆|分子|基因表达|重组融合蛋白质类,关键词:
     任侠飞 冯传汉 王申五 周柔丽 任侠飞、冯传汉 100034北京医科大学人民医院骨肿瘤研究室,王申五 血液病研究所;周柔丽 北京医科大学细胞生物学教研室 中华骨科杂志 1999 0 19 1


    关键词:巨细胞瘤;骨;抗体;单克隆;克隆;分子;基因表达;重组融合蛋白质类 期刊 zhgkzz 0 骨肿瘤 fur -->


    

【摘要】目的 GCF-5是骨巨细胞瘤(GCT)特异性单抗,其抗原是了解GCT特性的途径之一。为了利用这一途径,对GCF-5抗原的cDNA进行了克隆及表达。方法 盐酸胍和有机溶剂法提取总RNA,Oligo(dT)-Cellulose亲和层析法分离mRNA,反转录合成cDNA,用λgt11Sfi-Not表达载体构建cDNA文库,免疫学筛选并克隆GCF-5抗原的cDNA,大肠杆菌Y1089表达含GCF-5抗原的融合蛋白,细胞免疫抑制实验证实该融合蛋白含有GCF-5抗原成分。结果 经Oligo(dT)-Cellulose亲和层析法分离的mRNA,浓度达20.56μg/ml,OD260/280比值为1.869,经反转录所得的cDNA产物从数百到数千bp之间,产物完整;构建的λgt11Sfi-Not载体经体外包装后均呈无色透明噬斑,用抗体筛选出了一阳性噬斑,重复克隆化所得噬斑均可被抗体染色;该噬菌体感染大肠杆菌Y1089,分别于32℃与42℃培养,选出溶源菌,IPTG诱导融合蛋白,SDS-PAGE显示稍大于正常β-半乳糖苷酶的融合蛋白带,与融合蛋白预孵育后的抗体所做细胞免疫化学染色不显色。结论 构建了完整的GCTcDNA文库;克隆了GCF-5抗原的cDNA;表达出了含GCF-5抗原的融合蛋白;细胞免疫化学方法证明了该融合蛋白含有GCF-5抗原成分。

    GCF-5 Antigen’s cDNA Cloning ofGiant Cell Tumor of Bone and Its Expression in E.Coli.

REN Xiafei * ,FENG Chuanhan, WANG Shenwu,et al.

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