关键词：
材料与方法 : 1.标本来源和制备：我院1995年1月～1996年12月原发性肝内胆管结石患者(PIS)24例，其中男13例，女11例，因6例样本RNA降解，实际统计的患者为18例。选择手术患者7例作为正常对照组，其中胆囊息肉4例，胃癌3例，肝功能均正常。两组患者术中取肝组织活检，并取胆囊胆汁送细菌培养。2. ELISA法测定肝细胞葡萄糖醛酸酶(β-G)含量：β-G标准品111mg/ml(美国Saint Louis大学W.S.Sly先生惠赠),抗β-G单克隆抗体(鼠抗人)6D2-1和7B6-2由美国HO-KJ教授惠赠(University of Alabama)。标准品稀释梯度为2.22ng、1.11ng、0.55ng和0.277ng。肝细胞匀浆，取线粒体后液0.1ml，用于β-G含量测定。另取10ml用紫外分光光度计测定蛋白含量，以确定匀浆液中每微克蛋白β-G含量(ng/mg)。计算出正常组均数和标准差，高于正常组均数两倍以上为异常增高。3.β-GmRNA表达丰度的检测。(1)利用SalⅠ切下一400bp β-G cDNA片段，地高辛标记药盒进行标记制备探针。(2)液氮中保存的肝组织匀浆后提取RNA，用紫外分光光度计测定总RNA浓度，点于硝酸纤维素膜上，进行斑点杂交。用薄层扫描仪对显色的兰色斑点进行扫描(波长580nm)，得出每个样品波峰面积。计算每微克总RNA中β-GmRNA单位波峰面积，以比较两组mRNA的表达情况。
结果 : 18例PIS患者中有5例肝细胞源性β-G含量增高，胆汁内肝细胞源性β-G含量两组间差异无显著性(P >0.05)。斑点杂交结果表明，患者组波峰面积为716.7±430.50，正常对照组为427.19±344.42。5例β-G含量增高的患者，其β-G mRNA表达增高与正常组比较差异显著(P <0.05)。
讨论: 本组5例患者β-GmRNA波峰面积高于正常对照组，表明β-GmRNA表达升高与部分患者的发病有关。其余病人虽然没有β-GmRNA表达丰度的变化，是否存在mRNA的编辑，或β-G的构象、翻译过程的变化，有待于研究。胆汁内肝细胞性β-G含量，两组间无显著差异，说明肝细胞性β-G的作用部位不在胆管内。
本课题受国家自然科学基资助(No.39400128)
作者简介:赵青川,男,36岁,博士,讲师,发表论文20多篇.
(本文编辑：金生 校对：袁平戈)
(收稿：1998-01-12 修回：1998-05-13)
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