关键词：血管瘤；B细胞淋巴瘤/白血病-2基因；免疫组化
【摘要】 目的 阐明细胞凋亡抑制基因B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)与血管瘤的关系。方法 用免疫组化SP法检测38例血管瘤及6例正常皮肤组织中bcl-2的表达。结果 bcl-2在海绵状及蔓状血管瘤中表达高于正常；毛细血管瘤中表达低于正常；其间的差异有统计学意义。结论 从以上结果可以认为：海绵状及蔓状血管瘤增生与bcl-2表达增高有关；而bcl-2在毛细血管瘤中表达低说明其存在自然消退的可能。
The study on the role ofapoptosis suppressive gene bcl-2 in the pathogenesis of hemangioma
CHENG Lixin,LIANG Jie,TANGShaoming,et al.
The Institute of Plastic Surgery,Guangdon Medical College,Guangzhou 524023
【 Abstract 】 Objective Toelucidate the relationship between bcl-2 and hemangioma.Methods Weinvestigated the expression of bcl-2 in 38 samples of hemangioma (19 cases of capillaryhemangioma,10 cases of cavernous hemangioma,9 cases of racemose hemangioma) and 6 samplesof normal skin by immunohistochemical SP method.Results The resultsshowed that the expression of bcl-2 was higher in cavernous and racemose hemangioma thanin the controls,the expression of bcl-2 was lower in capillary hemangioma than in thecontrols.The differences were statistically significant.Conclusion It canbe deduced from the results that there is an intimate relationship between bcl-2 and thegrowth of cavernous and racemose hemangioma,and the lower expression of bcl-2 in capillaryhemangioma shows that capillary hemangioma may disappear naturally.
【 Keywords】 Hemangioma bcl-2 Immunohistochemistry
根据不同的临床病理表现特点，血管瘤可分为毛细血管瘤、海绵状血管瘤和蔓状血管瘤等。尽管血管瘤发病的原因及机理目前尚不完全清楚，但组织学研究发现毛细血管瘤与海绵状及蔓状血管瘤间存在着不同的发病机理。毛细血管瘤中血管内皮细胞是不成熟型，具有摄取I125 标记的胸苷等增殖特性，而海绵状及蔓状血管瘤的内皮细胞是成熟型，不具有摄取I125 标记的胸苷的特性，因而不具有增殖能力。近年来研究证明毛细血管瘤中增殖性细胞核抗原表达增高，与血管内皮细胞增殖有关的因子碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达增高，而这些在海绵状及蔓状血管瘤中不表达[1] ；这说明了毛细血管瘤的发病与血管内皮增殖有关，而海绵状及蔓状血管瘤与血管内皮细胞增殖无关。为了探讨海绵状及蔓状血管瘤发病的有关因素，我们对38例血管瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)的表达进行了检测。
1 材料和方法
1.1 收集标本
收集广东医学院附属医院病理科1994年1月至1996年8月血管瘤组织石蜡标本38例，年龄为2个月至20岁，毛细血管瘤19例，包括头面部(头皮、唇、颊、额、上睑)、颈部、手背、上臂、胸前壁、腰背部等；海绵状血管瘤10例，包括胸背、腰背、肝脏、下腹壁、上肢、舌、大腿、锁骨上、小腿等；蔓状血管瘤9例，包括小腿、颈肩、唇颊、腹股沟、背部、肩背等。
1.2 bcl-2检测
采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连结法(Streptavidinproxidase method,简称SP法)，SP试剂盒(进口分装)购于福州迈新生物技术公司。主要步骤：①每例标本作4μm切片1张，脱蜡水化；②过氧化物酶阻断内源性过氧化物酶，并进行微波修复；③非免疫动物血清以减少非特异性背景；④加bcl-2单克隆抗体；⑤加生物素标记第二抗体；⑥加链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶溶液；⑦新鲜配制的DAB溶液；⑧以苏木素作对比染色。
1.3 结果判断及统计学处理
bcl-2定位于细胞浆，光镜下见血管内皮细胞浆中棕黄色颗粒状沉淀，细胞核蓝色者为bcl-2染色阳性。用显微目镜网格，选10个不同视野，每个视野计数100个血管内皮细胞，共1000个细胞bcl-2阳性细胞数，换算成每100个细胞中bcl-2阳性细胞数，即阳性表达指数，计算每组bcl-2阳性表达指数均数和标准差，并进行比较，显著性差异用Q检验。
2 结果
38例血管瘤及正常对照组bcl-2表达如表1，海绵状血管瘤与蔓状血管瘤bcl-2表达差异没有显著意义(P>0.05)，海绵状及蔓状血管瘤bcl-2表达均高于正常(图1)，差异有非常显著意义(P<0.01);bcl-2在毛细血管瘤中表达低于正常(图2)，差异有非常显著意义(P<0.01)。
表1 38例不同类型血管瘤及正常对照组bcl-2阳性表达指数
Tab 1 The positive expression index of 38 cases of
different types hemangiomas and nomal contrast groups
| 组 别 | 例数 |  |
| 毛细血管瘤 | 19 | 6.37±4.79 |
| 海绵状血管瘤 | 10 | ** 59.70±8.22*# |
| 蔓状血管瘤 | 9 | ** 63.22±8.12* |
| 正常对照组 | 6 | 26.83±4.17* |
与毛细血管瘤比较:* P<0.01;与正常对照组比较:** P<0.01;与蔓状血管瘤比较:# P>0.05
图1 海绵状血管瘤，用bcl-2单克隆抗体进行免疫组化染色，其血管内皮细胞核中可见棕黄色颗粒状沉淀(SP×400)
Fig1 Cavernous hemangioma, underwent immunohistichemical staining by bcl-2 monolone antibody, brown yellow granulated sediment can be seen in its vascular endothelial cells(SP× 400)
图2 毛细血管瘤，用bcl-2单克隆抗体进行免疫组化染色，其血管内皮细胞核中可见棕黄色颗粒状沉淀(SP×400)
Fig2 Capillary hemangioma,underwent immunohistichemical staining by bcl-2 monolone antibody, brown yellow granulatedsediment can be seen in its vascular endothelial cells(SP× 400)
3 讨论
bcl-2首先由Tsujimoto在B细胞非何杰金氏淋巴瘤中发现，定位于18q/21染色体位点上。其结构特点是在羟基末端有一个由19个疏水键组成的疏水性片段，能使bcl-2蛋白插入膜结构中。bcl-2不同于其它癌基因，它不是促进细胞增殖，而是抑制细胞凋亡。其抑制细胞凋亡的机理可能有：①bcl-2蛋白作为一种抗氧化剂，调节细胞的氧化还原状态；②bcl-2与bax(bcl-2基因家族成员之一，功能上与bcl-2相反)结合成杂二聚体，以抑制bax的促凋亡作用[2] ；③bcl-2影响细胞钙离子重新分布，钙离子可激活内源性核酸内切酶和组织转谷氨酰胺酶；④蛋白激酶的级联放大，细胞骨架及其它小分子化合物的改变。
本研究发现海绵状及蔓状血管瘤组织中bcl-2表达高于正常，一方面增加血管内皮细胞对多种促凋亡因素的抗性，这包括去除血清和细胞因子，γ-射线、糖皮质激素、化疗药物等；另一方面通过上述机理抑制血管内皮细胞凋亡，从而致血管内皮细胞堆积而发生肿瘤。毛细血管瘤中bcl-2表达低于正常，说明并进一步证实其血管内皮细胞存在自行凋亡的可能。
在明确bcl-2与血管瘤的关系后，为我们临床治疗血管瘤提供了新的线索。海绵状及蔓状血管瘤中bcl-2表达高于正常，我们可使用细胞因子等方法使其ba1-2表达降低，从而诱发堆积的血管内皮细胞凋亡达到治疗目的。已知有这种作用的细胞因子有TGFβ1 (转化生长因子β1 )，TGFβ1 体外可使人脐静脉内皮细胞bcl-2表达下降，从而引起人脐静脉内皮细胞凋亡[3] 。是否存在其它细胞因子如肿瘤坏死因子、干扰素等尚需进一步探索。
本课题受广东省卫生厅资助
参考文献
1 Kazue T,John BM,Rick AR,et al.Celluarmarkers that distinguish the phases of hemangioma during infancy and childhood.J ClinInvest,1994,93:2357-2364.
2 Michael DJ,Julia FB,Michael PK,et al.bcl-2 blocks apoptosis in cells lackingmitochondrial DNA.Nature,1993,361:365-368.
3 Toshiaki T,Katsumi E,Kiyoshi M,et al.Transforming growth factor induce poptotic celldeath in cultured human umbilical vein endothelial cells with down-regulated expression ofbcl-2.Biochem Biophy Res Commun,1995,210:1076-1082.
(收稿：1997-09-12) , http://www.100md.com