香烟烟雾提取物和酪氨酸磷酸激酶抑制剂对猪气道上皮细胞β连环素表达的影响
关键词:
β连环素(β-cat)是与跨膜粘附分子钙粘附素(cadherin)相连的胞内特异蛋白质,介导同型细胞的连接,是维持上皮细胞极性及完整性的重要功能蛋白[1] 。我们采用体外培养猪气道上皮细胞(AEC),观察香烟烟雾提取物(CES)及酪氨酸磷酸激酶抑制剂(tyrophostin25)对AEC中β-cat表达的影响,探讨吸烟时AEC损伤中β-cat表达的变化及tyrophostin25对AEC的保护作用。
材料与方法 (1) 猪AEC的培养与鉴定及CSE的制备: 按王曦等[2] 的方法制备。(2)实验分组: 培养AEC经无血清培养基同步化16 h。对照组(N组)加入无血清培养基;CES1组、CSE2组、CSE3组加入CSE,终浓度分别为5%、10%、20%;tyrophostin组加入tyrophostin 25(30 μmol/L); tyrophostin+CSE3组加入tyrophostin 25(30μmol/L)和CSE(20%); 再孵育12至24 h。(3) 免疫组化SP 法染色,β-cat阳性反应为上皮细胞膜或细胞浆呈棕黄色染色。各组每张细胞片10×40倍数放大,随机记数300个上皮细胞,分别取β-cat胞膜阳性表达频数和胞浆阳性表达频数,进行χ2 检验。
结果 (1)形态学观察:CSE1、CSE2及CSE3组均出现不同程度的细胞肿胀,细胞间出现空隙或分散呈小片状 ......
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