应用流式细胞术检测高转移人卵巢癌细胞多基因产物的表达
关键词：
肿瘤分子生物学研究证实，癌基因和抑癌基因在肿瘤的发生、发展中具有重要作用。我们已应用免疫组织化学方法对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM和其母系HO-8910多基因表达进行研究[1] 。现应用流式细胞术(FCM)观察11种基因产物在细胞的表达，应用FCM检测不但可以定性，而且可以进行定量分析，以探讨不同基因在卵巢癌发生、发展和转移中的作用及相关性。
一、 材料和方法
1.材料：高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM[2] 和人卵巢癌细胞系HO-8910[3] 均为我研究所建立。
2.试剂：实验用基因抗体产品和标记方法见表1。间接法所用第二抗体为兔抗鼠IgG-FITC(武汉生物制品公司产品)。对照用鼠IgG-FITC(B.D公司产品)和鼠IgG-PE(Coulter公司产品)。
表1 HO-8910 PM与HO-8910两株细胞系
FCM检测结果
| 基因(产物) | 标记方法 | FCM检测阳性表达(%) | ||
| HO-8910 PM | HO-8910 | |||
| 雌激素受体(ER) | 间接法 | 66.5 | 64.8 | |
| 孕激素受体(PR) | 间接法 | 63.2 | 65.5 | |
| ras基因编码蛋白(p21) | 间接法 | 71.1 | 58.7 | |
| 细胞周期素蛋白(Cyclin D1) | 间接法 | 83.5 | 59.7 | |
| 转移抑制基因(nm23) | 间接法 | 64.6 | 68.9 | |
| 细胞周期相关抗原(Ki67) | 间接法 | 70.3 | 65.9 | |
| 增殖细胞核抗原(PCNA) | 间接法 | 76.7 | 63.3 | |
| 谷胱甘肽S转移酶(GSTπ) | 间接法 | 67.14 | 73.6 | |
| 粘附分子(CD44 ) | 直接法 | 79.3 | 54.1 | |
| 膜白细胞介素2受体(CD25) | 直接法 | 4.8 | 5.1 | |
| 多药耐药基因(MDR1) | 直接法 | 4.9 | 5.6 | |
3.方法：(1)间接法：分别在每管加20 μl第一抗体和不加抗体的空白对照管 ......
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