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编号:10924574
乙型肝炎病毒X蛋白上调前-X基因启动子表达活性
http://www.100md.com 白桂芹, 成 军, 刘 妍, 刘 蔚, 张树
白桂芹,成军,刘妍,刘蔚,张树林,通讯作者,:,摘要,目的,方法,结果,结论,.,3,讨论,4,参考文献
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     白桂芹,成军,刘妍, 刘蔚,北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011

    张树林,西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061

    国家自然科学基金资助,No. C03011402, No. C30070689

    军队九、五科技攻关项目,No. 98D063

    军队回国留学人员启动基金项目,No. 98H038

    军队十、五科技攻关青年基金项目,No. 01Q138

    军队十、五科技攻关面上项目,No. 01MB135

    通讯作者:成军,100011, 北京市东城区安外大街地坛公园13号,北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn

    电话: 010-64481639 传真:010-64281540

    收稿日期:2005-01-10 接受日期:2005-05-25

    摘要目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)对前-X基因启动子的调节作用,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.

    方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增HBV前X基因启动子,以T-A克隆法,将前-X基因启动子(promoter)的基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pGEMT-前-X-promoter与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和BglII 双酶切后构建前-X启动子报告基因表达载体pCAT3-前-X-promoter,以重组表达质粒pCAT3-前-X-promoter分别与pcDNA3.1空载体和HBxAg表达载体pcDNA-HBxAg瞬时转染HepG2细胞,以转染pCAT3basic的HepG2细胞为阴性对照,48h后收获细胞.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解HBxAg对前X基因启动子的调节作用.

    结果:构建的报告载体pCAT3-前-X-promoter经过序列分析和酶切鉴定正确 ......

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