第二十九章 免疫荧光检查法
根据抗原抗体特异性结合的反应特点，将荧光色素与某些特异性抗体（抗原）以化学的方法结合起来。（不影响血清抗体或抗原的免疫特性）而后将荧光标记了的抗体（抗原）在特定的条件下浸染标本，使与标本中的抗原（抗体）发生结合反应，反应后在荧光显微镜下观察到含有荧光标记的抗原抗体复合物的存在，根据已知抗原（或抗体）推知另一个未知的抗体（或抗原），以协助诊断。
【适应证】
在皮肤病中适用于细菌、病毒、衣原体、支原体等病原体感染的快速诊断，以及红斑狼疮、疱疹样皮炎、类天疱疮等病的诊断。
【方法】
1．直接免疫荧光法：用以检查病人的皮肤组织中有无免疫球蛋白或补体沉积，用特异荧光抗体直接滴加于待检的标本上，由荧光标记的抗体与抗原发生特异结合。使之呈现荧光，根据荧光分布和形态确定抗原部位和性质。此法用已知的抗体检查未知的抗原，但一种标记抗体只能查一种抗原，可直接采用病人的病变组织。如：红斑狼疮、疱疹样皮炎、类天疱疮等作冰冻切片，荧光染色。此法简单、特异。
采集标本后，直接涂于载玻片上，自然干燥后，丙酮固定10分钟，待丙酮完全挥发后，加30 l特异性的荧光素标记的抗体，室温湿盒内孵育30min，使标记的抗体与抗原发生特异性结合，取出后 蒸溜水冲洗去未结合的抗体，置荧光显微镜下观察。
2． 间接免疫荧光法：用以检测病人血清中是否存在某种特异抗体或自身抗体，反应中的两对抗原抗体相对应的特异结合，而第二抗体（荧光抗体）则针对第一抗体的结合体，由于第一抗原分子可与若干个抗体分子结合，因而第二结合反应后，灵敏度大大提高。本法常用于各种自身抗体的检测。如：系统性红斑狼疮、硬皮病等。
标本采后，保存于转送培养基中，临用前混匀后取悬液涂片，固定后加入50 l用PH 7.2 PBS 1:16稀释的特异性抗体，35℃孵育30分钟，取出后用PH 9.0的0.01 M的磷酸盐缓冲液浸泡10分钟，干燥后用50 l 1:500稀释的荧光抗体（第二抗体），35℃孵育30min，蒸溜水冲洗，干燥后甘油封固加盖玻片镜下观察。
3． 补体结合法：本法是在间接法的基础上发展而成的，即在抗原抗体反应时，加入补体，再用荧光标记的抗补体抗体进行示踪。如：检测妊娠疱疹病人的自身抗体。
【注意事项】
1．每次试验应该设阳性和阴性对照。
2． 应注意荧光抗体的质量。
3． 标本应及时检测，并避光保存。, 百拇医药
【适应证】
在皮肤病中适用于细菌、病毒、衣原体、支原体等病原体感染的快速诊断，以及红斑狼疮、疱疹样皮炎、类天疱疮等病的诊断。
【方法】
1．直接免疫荧光法：用以检查病人的皮肤组织中有无免疫球蛋白或补体沉积，用特异荧光抗体直接滴加于待检的标本上，由荧光标记的抗体与抗原发生特异结合。使之呈现荧光，根据荧光分布和形态确定抗原部位和性质。此法用已知的抗体检查未知的抗原，但一种标记抗体只能查一种抗原，可直接采用病人的病变组织。如：红斑狼疮、疱疹样皮炎、类天疱疮等作冰冻切片，荧光染色。此法简单、特异。
采集标本后，直接涂于载玻片上，自然干燥后，丙酮固定10分钟，待丙酮完全挥发后，加30 l特异性的荧光素标记的抗体，室温湿盒内孵育30min，使标记的抗体与抗原发生特异性结合，取出后 蒸溜水冲洗去未结合的抗体，置荧光显微镜下观察。
2． 间接免疫荧光法：用以检测病人血清中是否存在某种特异抗体或自身抗体，反应中的两对抗原抗体相对应的特异结合，而第二抗体（荧光抗体）则针对第一抗体的结合体，由于第一抗原分子可与若干个抗体分子结合，因而第二结合反应后，灵敏度大大提高。本法常用于各种自身抗体的检测。如：系统性红斑狼疮、硬皮病等。
标本采后，保存于转送培养基中，临用前混匀后取悬液涂片，固定后加入50 l用PH 7.2 PBS 1:16稀释的特异性抗体，35℃孵育30分钟，取出后用PH 9.0的0.01 M的磷酸盐缓冲液浸泡10分钟，干燥后用50 l 1:500稀释的荧光抗体（第二抗体），35℃孵育30min，蒸溜水冲洗，干燥后甘油封固加盖玻片镜下观察。
3． 补体结合法：本法是在间接法的基础上发展而成的，即在抗原抗体反应时，加入补体，再用荧光标记的抗补体抗体进行示踪。如：检测妊娠疱疹病人的自身抗体。
【注意事项】
1．每次试验应该设阳性和阴性对照。
2． 应注意荧光抗体的质量。
3． 标本应及时检测，并避光保存。, 百拇医药