胃镜活检组织快速检测克拉霉素耐药
目的:克拉霉素是根除幽门螺杆菌(Hp)的最有效抗生素之一,但该药耐药率的逐年增高降低了幽门螺杆菌的根除率,因此在胃镜活检组织中快速检测克拉霉素耐药对于指导临床用药很重要。
方法:琼脂稀释法筛选出的2002-2003年13株原发性、22株获得性临床克拉霉素耐药株以及相应的胃镜活检组织样本入选研究,提取细菌以及活检组织的基因组DNA。PCR特异扩增细菌DNA的23S rRNA基因的360 bp片段,用反向斑点杂交方法检测与克拉霉素耐药相关的23S rRNA基因的7种点突变(A2115G、G2141A、A2142G、A2142C、A2143G、A2143C和A2142T),同时用限制性片段长度多态性(RFLP)方法识别A2143G和A2142G以作对照。然后用选出的最佳方法直接从胃镜活检组织抽提的DNA检测克拉霉素耐药。
结果:13株原发耐药菌株都为A2143G点突变。22株获得性耐药菌株中21株为A2143G点突变,1株为A2142G点突变。PCR-RFLP得到的结果与反向斑点杂交的结果相符。用RCR-RFLP直接从胃镜活检组织检测的结果和从细菌DNA检测的结果一致。
结论:欧美的试验结果显示,A2142G、A2143G和A2142C突变在克拉霉素耐药中最为重要,其中又以A2142G与A2143G占主导地位,且所占比例接近。本研究显示,中国人群中以A2143G占主导地位,占97.14%(34/35),只在1株中发现A2142G突变。文献显示,A2142G、A2142C的克拉霉素耐药Hp菌株的最小抑菌浓度(MIC)值显著高于A2143G。中国琼脂稀释试验显示,克拉霉素高度耐药的菌株较少,这或许可以解释不同的基因型分布。PCR-RFLP能够检测出主导的A2143G突变,而且直接从胃镜活检组织的检测结果与琼脂稀释法的结果一致,检测时间大为缩短,因此是最好的快速检测方法。
(获本次大会优秀壁报一等奖), http://www.100md.com
方法:琼脂稀释法筛选出的2002-2003年13株原发性、22株获得性临床克拉霉素耐药株以及相应的胃镜活检组织样本入选研究,提取细菌以及活检组织的基因组DNA。PCR特异扩增细菌DNA的23S rRNA基因的360 bp片段,用反向斑点杂交方法检测与克拉霉素耐药相关的23S rRNA基因的7种点突变(A2115G、G2141A、A2142G、A2142C、A2143G、A2143C和A2142T),同时用限制性片段长度多态性(RFLP)方法识别A2143G和A2142G以作对照。然后用选出的最佳方法直接从胃镜活检组织抽提的DNA检测克拉霉素耐药。
结果:13株原发耐药菌株都为A2143G点突变。22株获得性耐药菌株中21株为A2143G点突变,1株为A2142G点突变。PCR-RFLP得到的结果与反向斑点杂交的结果相符。用RCR-RFLP直接从胃镜活检组织检测的结果和从细菌DNA检测的结果一致。
结论:欧美的试验结果显示,A2142G、A2143G和A2142C突变在克拉霉素耐药中最为重要,其中又以A2142G与A2143G占主导地位,且所占比例接近。本研究显示,中国人群中以A2143G占主导地位,占97.14%(34/35),只在1株中发现A2142G突变。文献显示,A2142G、A2142C的克拉霉素耐药Hp菌株的最小抑菌浓度(MIC)值显著高于A2143G。中国琼脂稀释试验显示,克拉霉素高度耐药的菌株较少,这或许可以解释不同的基因型分布。PCR-RFLP能够检测出主导的A2143G突变,而且直接从胃镜活检组织的检测结果与琼脂稀释法的结果一致,检测时间大为缩短,因此是最好的快速检测方法。
(获本次大会优秀壁报一等奖), http://www.100md.com