http://www.100md.com
利用脐带血穿刺标本产前诊断杜氏肌营养不良症1例
北京大学人民医院 刘国莉* 赵耘 刘春雨 黄振宇 张丽江
孕妇34岁，妊1产0，籍贯上海，家族中其舅舅、弟弟均患杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)，皆于少年期死亡。本人非近亲结婚，孕18周，要求产前诊断，转入我院。孕期无特殊，B超提示胎儿与孕周相符、未见异常。入院后行B超引导下羊膜腔穿刺，诊断胎儿为男性后行胎儿脐带血穿刺，抽取胎儿血化验肌酸磷酸肌酶，并按常规方法提取DNA。同时取孕妇外周血做DNA检测。按照Beggs[1]和Chamberlain[2]方法设计了16对引物，包含肌营养不良蛋白(dystrophin)基因启动子(Pm)、外显子3、6、8、13、17、19、43-52(46、51除外)及60易发生基因缺失热点区(引物由北京三博远志生物技术有限公司提供)。DNA PCR扩增均分两次在2个反应管中进行，分别用9对引物[1]和7对引物[2],前者方法同文献1，后者方法与文献2大体相同，只是将退火温度改为54℃。取反应液10μl和DNA 大小标记物同时点样于1.4%琼脂糖凝胶中，80V电压电泳1小时。结果：孕妇外周血和胎儿血结果见表1，显示脐血CPK 523U/L，CK-MB 32U/L，LDH 403 U/L均显著升高，AST轻度异常，孕妇相应酶学亦有轻度改变。PCR扩增结果如图1示：胎儿外显子47、50、52、45、48、49有基因缺失，孕妇为携带者，相应条带较正常阳性对照的条带有减弱。向家属交代病情后，要求其终止妊娠，于孕23周行药物引产，娩一男死胎，外观未见明显异常。
1. DNA Marker 2. 阳性对照 3. 孕妇 1. DNA Marker 2. 阳性对照 3. 孕妇
4. 胎儿 5. 阴性对照 4. 胎儿 5. 阴性对照
图1 多重PCR扩增电泳结果
表1：孕妇及胎儿相关肌酶指标测定结果
受检对象ALT(U/L)AST(U/L)CPK(U/L)LDH(U/L)α-羟丁酸脱氢酶(U/L)CPK-MB(U/L)孕 妇
胎 儿20
223
45719
北京大学人民医院 刘国莉* 赵耘 刘春雨 黄振宇 张丽江
孕妇34岁，妊1产0，籍贯上海，家族中其舅舅、弟弟均患杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)，皆于少年期死亡。本人非近亲结婚，孕18周，要求产前诊断，转入我院。孕期无特殊，B超提示胎儿与孕周相符、未见异常。入院后行B超引导下羊膜腔穿刺，诊断胎儿为男性后行胎儿脐带血穿刺，抽取胎儿血化验肌酸磷酸肌酶，并按常规方法提取DNA。同时取孕妇外周血做DNA检测。按照Beggs[1]和Chamberlain[2]方法设计了16对引物，包含肌营养不良蛋白(dystrophin)基因启动子(Pm)、外显子3、6、8、13、17、19、43-52(46、51除外)及60易发生基因缺失热点区(引物由北京三博远志生物技术有限公司提供)。DNA PCR扩增均分两次在2个反应管中进行，分别用9对引物[1]和7对引物[2],前者方法同文献1，后者方法与文献2大体相同，只是将退火温度改为54℃。取反应液10μl和DNA 大小标记物同时点样于1.4%琼脂糖凝胶中，80V电压电泳1小时。结果：孕妇外周血和胎儿血结果见表1，显示脐血CPK 523U/L，CK-MB 32U/L，LDH 403 U/L均显著升高，AST轻度异常，孕妇相应酶学亦有轻度改变。PCR扩增结果如图1示：胎儿外显子47、50、52、45、48、49有基因缺失，孕妇为携带者，相应条带较正常阳性对照的条带有减弱。向家属交代病情后，要求其终止妊娠，于孕23周行药物引产，娩一男死胎，外观未见明显异常。
1. DNA Marker 2. 阳性对照 3. 孕妇 1. DNA Marker 2. 阳性对照 3. 孕妇
4. 胎儿 5. 阴性对照 4. 胎儿 5. 阴性对照
图1 多重PCR扩增电泳结果
表1：孕妇及胎儿相关肌酶指标测定结果
受检对象ALT(U/L)AST(U/L)CPK(U/L)LDH(U/L)α-羟丁酸脱氢酶(U/L)CPK-MB(U/L)孕 妇
胎 儿20
223
45719