人乳腺癌全套抗体可变区基因的扩增与克隆
吕勇刚. 窦科峰. 吴昱彤. 赵爱志. 刘杰. 陈刚. 陶开山. 药立波.
第四军医大学西京医院肝胆外科. 唐都医院信息科. 第四军医大学西京医院基础部药理学教研室. 西安交通大学第一医院血液科. 第四军医大学西京医院基础部生物化学教研室 陕西西安710033 . 陕西西安710038 . 陕西西安710032 . 陕西西安710061 .
【关键词】
聚合酶链式反应. 乳腺癌. 抗体基因. T载体.
【发表年期页】
2004,6; 558
【摘要】
目的扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法收集乳腺癌患者外周转移淋巴结30例,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA,行RTPCR扩增,制备T载体,用于PCR产物的克隆。结果总RNA纯度高,完整性好,mRNA获得率为1%。经RTPCR,VH、Vλ、Vκ的每一条5端引物均与其相应的3端引物成功地扩增出了可变区基因片段,轻、重链T载体库分别为1.7×108和3.5×108。结论所采用的引物能够100%扩增目的片段,T载体过渡能显著提高克隆效率,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。, 百拇医药( 吕勇刚. 窦科峰. 吴昱彤. 赵爱志.)
第四军医大学西京医院肝胆外科. 唐都医院信息科. 第四军医大学西京医院基础部药理学教研室. 西安交通大学第一医院血液科. 第四军医大学西京医院基础部生物化学教研室 陕西西安710033 . 陕西西安710038 . 陕西西安710032 . 陕西西安710061 .
【关键词】
聚合酶链式反应. 乳腺癌. 抗体基因. T载体.
【发表年期页】
2004,6; 558
【摘要】
目的扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法收集乳腺癌患者外周转移淋巴结30例,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA,行RTPCR扩增,制备T载体,用于PCR产物的克隆。结果总RNA纯度高,完整性好,mRNA获得率为1%。经RTPCR,VH、Vλ、Vκ的每一条5端引物均与其相应的3端引物成功地扩增出了可变区基因片段,轻、重链T载体库分别为1.7×108和3.5×108。结论所采用的引物能够100%扩增目的片段,T载体过渡能显著提高克隆效率,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。, 百拇医药( 吕勇刚. 窦科峰. 吴昱彤. 赵爱志.)