小儿肾病综合征红细胞膜电荷及血液流变学变化的研究
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高晓洁. 李瑞林. 王亚萍. 王志刚.
肾病综合征.蛋白尿.红细胞膜电荷.Alcian蓝.血液流变学.
参见附件(179kb)。
作者：高晓洁 李瑞林 王亚萍 王志刚 付清川 向莉 毛云英 陈玺 张蓉
单位：(西安交通大学第二医院儿科学教研室，西安 710004)
关键词：肾病综合征；蛋白尿；红细胞膜电荷；Alcian蓝；血液流变学
西安医科大学学报000313摘 要：目的 探讨肾病综合征患儿蛋白尿的发生机制及其影响因素。方法 以红细胞(RBC)膜Alcian蓝(AB)结合量为指标观测36例肾病综合征(NS)患儿RBC膜电荷量，并测定其血液流变学各指标。结果 (1)患儿RBC膜AB结合量明显降低，但其RBC表面主要阴离子涎酸含量并未减少，提示NS患儿RBC膜电荷量呈“功能性”降低。(2)患儿全血粘度(高切及低切)、血浆粘度、血沉、红细胞压积、红细胞电泳时间、血沉方程K值、红细胞聚集指数、全血还原比粘度等指标均明显增高，提示NS患儿血液呈现高粘滞、高聚集、高浓缩状态。(3)多元逐步回归分析结果提示NS患儿尿蛋白量受RBC膜电荷及血粘度的影响。结论 恢复肾小球电荷屏障功能、纠正血流变异常对于减少蛋白尿、改善血流状态、减少并发症、恢复肾功能具有重要意义。
中图分类号：R726.9 文献标识码：A
文章编号：0258-0659(2000)03-0231-03
Study of the change of red blood cell membrane′s
charge and of hemorheology in nephrotic children
Gao Xiaojie，Li Ruilin，Wang Yaping
(Department of Pediatrics,Second Hospital,Xi′an Jiaotong University, Xi′an 710004,China)
ABSTRACT：Objective To study the mechanism and relative effects about nephrotic syndrome.Methods The charge on the surface of RBC which was indicated by Alcian Blue(AB) bindig amount was determined in 36 patients of nephrotic syndrome (NS) .Some hemorheological indexes of these patients were also measured.Results ①The AB binding amount on RBC of NS children is decreased, but the sialic acid (the main negative charge substance) content on RBC is normal.It meant that the reduction of negative charge on nephrotic RBC was“ functional”;②The hemorheological indexes such as:blood viscosity(Vb1,Vb2), plasma viscosity(Vp),haematocrit (HCT), erythrocyte sedimentation rate(ESR),erythrocyte electrophoretic time(EPT),erythrocyte aggregation index(EAI), reduced blood viscosity(Vb1’) and K value of NS children were significantly higher than that of normal control.It indicated that the blood stream of NS children showed a state with “high viscosity”,“high aggregation” and “high concentration”;③Multiple linear regression and stepwise regression analytic results:nephrotic proteinuria was influenced by the membrane charge of RBC and blood viscosity. Conclusion It is very important to recover the membrane charge of RBC and to change hemorheological condition for children suffering NS.
KEY WORDS：nephrotic syndrome(NS);proteinuria;red blood cell (RBC);membrane charge;alcian blue;hemorheology
肾病综合征(Nephrotic syndrome ,NS)是小儿常见疾病之一，近年来其发病呈上升趋势。关于其蛋白尿的发生机制目前尚无定论。本文检测了36例NS患儿的红细胞膜阴电荷量及血液流变学各指标，并利用多元回归分析初步探讨NS蛋白尿的发生机制及其影响因素，现报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象 36例NS患儿，均符合1981年全国儿科肾脏病科研协作组建议诊断标准[1]。病例来源于1996年西安市儿童医院、西安交通大学第二医院及陕西省人民医院的住院病儿。男27例，女9例，男∶女=3∶1，年龄：1岁半～14岁，平均5岁半。临床分型：单纯性肾病33例，肾炎性肾病3例。36例患儿均无心、肝及血液系统疾患。对照组：健康儿童32名，来源于西安交通大学第二医院儿保门诊正常查体儿童。男21名，女11名，男∶女=1.9∶1;年龄1～14岁，平均5岁5个月，与观察组对比在性别及年龄上无显著性差异(P>0.05)。
1.2 实验方法 ①RBC膜电荷测定[2]：取晨起空腹静脉全血2ml，肝素抗凝(浓度：3.125×104U/L),离心(2 000r/min)收集RBC，以磷酸缓冲液(PBS，pH7.4)洗涤3次后，调至1.2×109/ml浓度。取浓度为1.2×109/ml的红血球1ml与浓度为125μg/ml的AB染液(按O′Brien等[3，5]的方法临用前配制)1ml混匀，37℃水浴30min后离心(2 000r/min),取上清液在721分光光度计上于波长650nm处测定未结合AB的光密度，以直线回归方程计算与RBC结合的AB量。另外，将收集的RBC先用0.9%氯化钠溶液(pH7.0)和磷酸缓冲液(0.01mol/L,pH7.0)洗涤两次，再用含10mol/L氯化钙的0.83%氯化钠溶液洗一次，然后按每ml压实红细胞加0.2U神经氨酸酶，在37℃水浴30min，取出后再用生理盐水洗3次，然后调浓度至1.2×109/ml，再按前法行AB染色。②血液流变学参数的测定：抽取晨起空腹静脉血4ml(一般1～3岁抽取颈或股静脉血，3岁以上抽取肘前静脉血，观察组与对照组在抽血方法及部位上基本一致)，以浓度为3.125×104U/L肝素抗凝血。参考上海第一医科大学生物物理教研室介绍的血流变指标测定方法[4]，在XN-5型血液粘度计上进行检测(抽血后4h内完成检测)。
1.3 统计方法 实验结果以均数±标准差(
±s)来表示，两均数间比较用t检验或t′检验(方差不齐时)；两变量间相关分析及多元回归分析经SAS，6.03统计软件包处理。
2 结果
2.1 患儿红细胞膜电荷变化 患儿RBC膜上AB结合量见表1。由表2可见，NS患儿的RBC经神经氨酸酶处理后，其AB结合量的下降程度与健康儿童的下降程度无显著差别，表明NS时虽有RBC膜阴电荷含量的减少，但其表面主要的阴离子—涎酸的含量并无变化。
表1 患儿RBC膜上AB结合量(ng/1.2×106RBC) 组 别
n
AB结合量
t
P
肾病组
对照组
36
32
71.37±6.5
79.52±5.8
5.43
<0.001
表2 NS患儿RBC表面阴离子含量(ng/1.2×106RBC) 组 别
例数①
酶处理前②
酶处理后②
阴离子含量③
t
P
肾病组
对照组
18
18
72.13±6.73
80.44±4.65
57.29±5.46
65.33±7.01
14.84±3.49
15.11±5.08
0.186
>0.05
注：①肾病组18例及正常组18例分别随机选自表1中的实验对象
②指神经氨酸酶处理前后每1.2×106RBC所结合的AB量(ng)
③酶处理前后每1.2×106RBC所结合AB量的差值(ng)
2.2 患儿血液流变学变化 NS患儿全血粘度(高切及低切、Vb1及Vb2)、血浆粘度(Vp)、血沉(ESR)、红细胞压积(HCT)、红细胞电泳时间(EPT)、血沉方程K值(K)、红细胞聚集指数(EAI)、全血还原粘度高切(Vb1′)等指标均高于正常对照组(表3)，差异具有非常显著性意义。表3 NS患儿血液流液学参数变化(±s) 指 标
肾病组(n=36)
对照组(n=32)
t(t′)
P
Vb1
7.03±1.27
5.09±0.75
5.83
<0.001
Vb2
14.09±4.16
8.18±1.60
7.56
<0.001
Vp
1.9±0.20
1.66±0.12
7.69
<0.001
ESR(mm/h)
41.78±9.89
16.59±12.31
9.23*
<0.001
HCT(%)
45.14±4.24
40.38±4.26
4.62*
<0.01
EPT(s)
18.22±1.56
15.94±0.77
2.43
<0.001
Vb1′
13.37±2.43
10.12±1.47
6.56
<0.001
K
166.87±35.64
51.11±32.53
13.89*
<0.001
EAI
1.99±0.36
1.59±0.25
5.36*
<0.001
带*者均系t′值
2.3 患儿尿蛋白的影响因素 以多元线性回归分析筛查影响NS患儿尿蛋白排出量的因素，选择AB结合量及血流变参数(Vb1、Vb2、Vp,ESR,HCT,EPT)为自变量，分析结果见表4。
表4 NS患儿尿蛋白影响因素多元线性回归分析 变量
偏回归系数
标准误
T
Prob>｜T｜
AB结合量
-0.154
0.063
-2.38
0.03
Vb1
8.79
4.09
2.15
0.04
Vb2
3.62
1.53
2.37
0.03
Vp
18.26
7.05
2.59
0.02
ESR
-0.017
0.21
-0.08
0.93
HCT
0.535
0.59
0.91
0.37
EPT
0.526
0.25
2.10
0.04
由表可见，在上述变量中，AB结合量、Vb1、Vb2、Vp及EPT对尿蛋白排出量有影响(P<0.05)。在此基础上，我们对上述自变量进行了逐步回归分析，结果如表5所示：红细胞膜电荷量对回归方程的贡献最大，其后依次为血浆粘度、全血粘度。表5 NS患儿尿蛋白影响因素逐步回归分析 步骤
变量
全相关系数平方
统计量
F
Pro>F*
1
AB结合量
0.2855
15.7087
13.5838
0.008
2
Vp
0.3860
10.9988
5.4008
0.0264
3
Vb1
0.4415
9.2883
3.1843
0.0838
4
Vb2
0.5042
7.1072
3.9149
0.0568
*显著性水平选择在0.15水平
3 讨论
3.1 NS患儿RBC膜电荷的变化 Alcian蓝(AB)是一种离子染剂，而RBC膜电荷主要由膜表面的唾液酸(SA)所带阴电荷构成[5]。因此，可利用AB与RBC膜的结合量来检测RBC表面阴电荷的含量。经神经氨酸酶处理后的RBC其AB结合量有所减少，说明AB与RBC的结合量可反映RBC膜电荷含量。经该酶处理前后AB结合量的差值即为RBC膜上主要的阴离子物质(SA)的含量。本文实验结果证实：观察组RBC膜AB结合量明显低于对照组，但其膜表面的SA含量与对照组相比无显著性差异，此点为我们探讨NS蛋白尿的发生机制提供了重要线索。
RBC膜电荷含量减少的原因有以下三种可能：①RBC膜上阴离子合成障碍；②RBC膜上阴离子被去除(如经酶处理)；③RBC膜上阴离子被阳离子中和。本研究表明NS患儿RBC膜阴离子含量并未减少，但其阴电荷密度明显降低，即所谓“功能性”膜电荷减少。国外有学者证实NS患儿血小板及肾小球阴电荷量亦呈同步减少[2，6]。从以上几种生物膜电荷变化的一致性似可推论，NS可能是一种全身性生物膜电荷变化性疾病，其蛋白尿发生的部分原因可能是肾小球阴电荷屏障被中和而使其电荷屏障功能受损所致。
3.2 NS患儿血液流变学变化 血液做为一种非牛顿液体，在血管内流动受血管因素、血球因素及血浆因素的影响。NS时由于存在蛋白质及脂质代谢紊乱，同时多伴有高凝血症，具备了血流异常的条件，本研究结果亦证实NS患儿血液呈现高粘滞、高聚集、高浓缩状态。一般认为，RBC聚集性受多种因素的影响，包括膜的理化结构，静电荷与静电力、大分子的存在及其体积与活性[7，9]，其中主要因素是RBC表面电荷及RBC之间大分子蛋白的长链桥接。NS时由于静电斥力减弱，致RBC聚集能力大大增强，全血粘度随之升高[10]。此外，血浆粘度增高、红血球压积增高、高脂血症等均是高血粘度的促成因素。
3.3 肾病综合征蛋白尿的影响因素 本文对肾病患儿尿蛋白量的多元逐步回归分析证实，RBC膜电荷含量、血液粘度、血浆粘度对患儿的尿蛋白量均有影响，其影响力大小依次为RBC膜AB结合量，血浆粘度及全血粘度。NS时血液呈高粘滞状态已如前述，而血液粘度的增高往往导致循环减缓以及组织氧饱和程度的降低。Simpson[8]曾提出假说：高血粘度可引起肾小球毛细血管后阻力增加，从而导致肾小球内压力增高，血浆蛋白透过GBM导致蛋白尿，本文对尿蛋白的多因素分析亦支持此观点。
综上所述，肾小球滤过膜电荷含量减少导致蛋白尿，而血细胞膜电荷含量减少可使血细胞聚集能力增强，加之蛋白尿所致的血浆蛋白成分改变，高脂血症及血液浓缩等因素又可使血液呈现高粘滞状态，而高粘血症又可进一步加重蛋白尿，由此产生恶性循环。因此，设法恢复肾小球电荷屏障功能，纠正血流变异常对于减轻蛋白尿，改善血流状态，减少并发症，恢复肾功能具重要意义。
基金项目：陕西省自然科学基金资助项目(No.96SM44)
参考文献：
[1] 姜新猷，陈荣华，王宝琳整理.《关于小儿肾小球疾病临床分类和治疗的建议》的修订意义[J].中华儿科杂志，1981，19(1)∶24
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[3] O′Brien J ,Emmerling ME.Estimation of glycosaminoglycans by atomic absorption determination of copper in their alcian blue complexes[J].Anal Biochem,1978，85(4)∶377
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[5] Ramjee G, Abhikari M, Coovadia HM, ,et al.Anionic charge abnormalities of red blood cells and proteinuria in glomerulonephritides[J].J Trop Pediatr, 1997，43(4)∶204
[6] Candiano G. Interaction between cationic dyes and erythrocyte membranes in minimal change nephropathy:an electrophoretic approach[J].Pediatr Nephrol,1991，5(2)∶173
[7] 田 牛.微循环障碍与相关疾病[M].河南：科学技术出版社，1985.11，98
[8] Simpson LI.A hypothesis proposing increased blood viscosity as a cause of proteinuria and increased vascular permeability[J].Nephron, 1982，31(1)∶89
[9] Taylor GM,Neuhaus TJ,Shah V ,et al.Charge and size selectivity of proteinuria in children with idiopathic nephrotic syndrom[J].Pediatr Nephrol,1997，11(4)∶404
[10]Sahu S,Nageswari K,Baneryee R,et al.Hemorheologial changes in nephrotic syndroml[J].Clin Hemorheol Microcire, 1998，19(1)∶17
(收稿日期:1999-12-14 修回日期：2000-01-25)
作者：高晓洁 李瑞林 王亚萍 王志刚 付清川 向莉 毛云英 陈玺 张蓉
单位：(西安交通大学第二医院儿科学教研室，西安 710004)
关键词：肾病综合征；蛋白尿；红细胞膜电荷；Alcian蓝；血液流变学
西安医科大学学报000313摘 要：目的 探讨肾病综合征患儿蛋白尿的发生机制及其影响因素。方法 以红细胞(RBC)膜Alcian蓝(AB)结合量为指标观测36例肾病综合征(NS)患儿RBC膜电荷量，并测定其血液流变学各指标。结果 (1)患儿RBC膜AB结合量明显降低，但其RBC表面主要阴离子涎酸含量并未减少，提示NS患儿RBC膜电荷量呈“功能性”降低。(2)患儿全血粘度(高切及低切)、血浆粘度、血沉、红细胞压积、红细胞电泳时间、血沉方程K值、红细胞聚集指数、全血还原比粘度等指标均明显增高，提示NS患儿血液呈现高粘滞、高聚集、高浓缩状态。(3)多元逐步回归分析结果提示NS患儿尿蛋白量受RBC膜电荷及血粘度的影响。结论 恢复肾小球电荷屏障功能、纠正血流变异常对于减少蛋白尿、改善血流状态、减少并发症、恢复肾功能具有重要意义。
中图分类号：R726.9 文献标识码：A
文章编号：0258-0659(2000)03-0231-03
Study of the change of red blood cell membrane′s
charge and of hemorheology in nephrotic children
Gao Xiaojie，Li Ruilin，Wang Yaping
(Department of Pediatrics,Second Hospital,Xi′an Jiaotong University, Xi′an 710004,China)
ABSTRACT：Objective To study the mechanism and relative effects about nephrotic syndrome.Methods The charge on the surface of RBC which was indicated by Alcian Blue(AB) bindig amount was determined in 36 patients of nephrotic syndrome (NS) .Some hemorheological indexes of these patients were also measured.Results ①The AB binding amount on RBC of NS children is decreased, but the sialic acid (the main negative charge substance) content on RBC is normal.It meant that the reduction of negative charge on nephrotic RBC was“ functional”;②The hemorheological indexes such as:blood viscosity(Vb1,Vb2), plasma viscosity(Vp),haematocrit (HCT), erythrocyte sedimentation rate(ESR),erythrocyte electrophoretic time(EPT),erythrocyte aggregation index(EAI), reduced blood viscosity(Vb1’) and K value of NS children were significantly higher than that of normal control.It indicated that the blood stream of NS children showed a state with “high viscosity”,“high aggregation” and “high concentration”;③Multiple linear regression and stepwise regression analytic results:nephrotic proteinuria was influenced by the membrane charge of RBC and blood viscosity. Conclusion It is very important to recover the membrane charge of RBC and to change hemorheological condition for children suffering NS.
KEY WORDS：nephrotic syndrome(NS);proteinuria;red blood cell (RBC);membrane charge;alcian blue;hemorheology
肾病综合征(Nephrotic syndrome ,NS)是小儿常见疾病之一，近年来其发病呈上升趋势。关于其蛋白尿的发生机制目前尚无定论。本文检测了36例NS患儿的红细胞膜阴电荷量及血液流变学各指标，并利用多元回归分析初步探讨NS蛋白尿的发生机制及其影响因素，现报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象 36例NS患儿，均符合1981年全国儿科肾脏病科研协作组建议诊断标准[1]。病例来源于1996年西安市儿童医院、西安交通大学第二医院及陕西省人民医院的住院病儿。男27例，女9例，男∶女=3∶1，年龄：1岁半～14岁，平均5岁半。临床分型：单纯性肾病33例，肾炎性肾病3例。36例患儿均无心、肝及血液系统疾患。对照组：健康儿童32名，来源于西安交通大学第二医院儿保门诊正常查体儿童。男21名，女11名，男∶女=1.9∶1;年龄1～14岁，平均5岁5个月，与观察组对比在性别及年龄上无显著性差异(P>0.05)。
1.2 实验方法 ①RBC膜电荷测定[2]：取晨起空腹静脉全血2ml，肝素抗凝(浓度：3.125×104U/L),离心(2 000r/min)收集RBC，以磷酸缓冲液(PBS，pH7.4)洗涤3次后，调至1.2×109/ml浓度。取浓度为1.2×109/ml的红血球1ml与浓度为125μg/ml的AB染液(按O′Brien等[3，5]的方法临用前配制)1ml混匀，37℃水浴30min后离心(2 000r/min),取上清液在721分光光度计上于波长650nm处测定未结合AB的光密度，以直线回归方程计算与RBC结合的AB量。另外，将收集的RBC先用0.9%氯化钠溶液(pH7.0)和磷酸缓冲液(0.01mol/L,pH7.0)洗涤两次，再用含10mol/L氯化钙的0.83%氯化钠溶液洗一次，然后按每ml压实红细胞加0.2U神经氨酸酶，在37℃水浴30min，取出后再用生理盐水洗3次，然后调浓度至1.2×109/ml，再按前法行AB染色。②血液流变学参数的测定：抽取晨起空腹静脉血4ml(一般1～3岁抽取颈或股静脉血，3岁以上抽取肘前静脉血，观察组与对照组在抽血方法及部位上基本一致)，以浓度为3.125×104U/L肝素抗凝血。参考上海第一医科大学生物物理教研室介绍的血流变指标测定方法[4]，在XN-5型血液粘度计上进行检测(抽血后4h内完成检测)。
1.3 统计方法 实验结果以均数±标准差(
±s)来表示，两均数间比较用t检验或t′检验(方差不齐时)；两变量间相关分析及多元回归分析经SAS，6.03统计软件包处理。2 结果
2.1 患儿红细胞膜电荷变化 患儿RBC膜上AB结合量见表1。由表2可见，NS患儿的RBC经神经氨酸酶处理后，其AB结合量的下降程度与健康儿童的下降程度无显著差别，表明NS时虽有RBC膜阴电荷含量的减少，但其表面主要的阴离子—涎酸的含量并无变化。
表1 患儿RBC膜上AB结合量(ng/1.2×106RBC) 组 别
n
AB结合量
t
P
肾病组
对照组
36
32
71.37±6.5
79.52±5.8
5.43
<0.001
表2 NS患儿RBC表面阴离子含量(ng/1.2×106RBC) 组 别
例数①
酶处理前②
酶处理后②
阴离子含量③
t
P
肾病组
对照组
18
18
72.13±6.73
80.44±4.65
57.29±5.46
65.33±7.01
14.84±3.49
15.11±5.08
0.186
>0.05
注：①肾病组18例及正常组18例分别随机选自表1中的实验对象
②指神经氨酸酶处理前后每1.2×106RBC所结合的AB量(ng)
③酶处理前后每1.2×106RBC所结合AB量的差值(ng)
2.2 患儿血液流变学变化 NS患儿全血粘度(高切及低切、Vb1及Vb2)、血浆粘度(Vp)、血沉(ESR)、红细胞压积(HCT)、红细胞电泳时间(EPT)、血沉方程K值(K)、红细胞聚集指数(EAI)、全血还原粘度高切(Vb1′)等指标均高于正常对照组(表3)，差异具有非常显著性意义。表3 NS患儿血液流液学参数变化(
±s) 指 标肾病组(n=36)
对照组(n=32)
t(t′)
P
Vb1
7.03±1.27
5.09±0.75
5.83
<0.001
Vb2
14.09±4.16
8.18±1.60
7.56
<0.001
Vp
1.9±0.20
1.66±0.12
7.69
<0.001
ESR(mm/h)
41.78±9.89
16.59±12.31
9.23*
<0.001
HCT(%)
45.14±4.24
40.38±4.26
4.62*
<0.01
EPT(s)
18.22±1.56
15.94±0.77
2.43
<0.001
Vb1′
13.37±2.43
10.12±1.47
6.56
<0.001
K
166.87±35.64
51.11±32.53
13.89*
<0.001
EAI
1.99±0.36
1.59±0.25
5.36*
<0.001
带*者均系t′值
2.3 患儿尿蛋白的影响因素 以多元线性回归分析筛查影响NS患儿尿蛋白排出量的因素，选择AB结合量及血流变参数(Vb1、Vb2、Vp,ESR,HCT,EPT)为自变量，分析结果见表4。
表4 NS患儿尿蛋白影响因素多元线性回归分析 变量
偏回归系数
标准误
T
Prob>｜T｜
AB结合量
-0.154
0.063
-2.38
0.03
Vb1
8.79
4.09
2.15
0.04
Vb2
3.62
1.53
2.37
0.03
Vp
18.26
7.05
2.59
0.02
ESR
-0.017
0.21
-0.08
0.93
HCT
0.535
0.59
0.91
0.37
EPT
0.526
0.25
2.10
0.04
由表可见，在上述变量中，AB结合量、Vb1、Vb2、Vp及EPT对尿蛋白排出量有影响(P<0.05)。在此基础上，我们对上述自变量进行了逐步回归分析，结果如表5所示：红细胞膜电荷量对回归方程的贡献最大，其后依次为血浆粘度、全血粘度。表5 NS患儿尿蛋白影响因素逐步回归分析 步骤
变量
全相关系数平方
统计量
F
Pro>F*
1
AB结合量
0.2855
15.7087
13.5838
0.008
2
Vp
0.3860
10.9988
5.4008
0.0264
3
Vb1
0.4415
9.2883
3.1843
0.0838
4
Vb2
0.5042
7.1072
3.9149
0.0568
*显著性水平选择在0.15水平
3 讨论
3.1 NS患儿RBC膜电荷的变化 Alcian蓝(AB)是一种离子染剂，而RBC膜电荷主要由膜表面的唾液酸(SA)所带阴电荷构成[5]。因此，可利用AB与RBC膜的结合量来检测RBC表面阴电荷的含量。经神经氨酸酶处理后的RBC其AB结合量有所减少，说明AB与RBC的结合量可反映RBC膜电荷含量。经该酶处理前后AB结合量的差值即为RBC膜上主要的阴离子物质(SA)的含量。本文实验结果证实：观察组RBC膜AB结合量明显低于对照组，但其膜表面的SA含量与对照组相比无显著性差异，此点为我们探讨NS蛋白尿的发生机制提供了重要线索。
RBC膜电荷含量减少的原因有以下三种可能：①RBC膜上阴离子合成障碍；②RBC膜上阴离子被去除(如经酶处理)；③RBC膜上阴离子被阳离子中和。本研究表明NS患儿RBC膜阴离子含量并未减少，但其阴电荷密度明显降低，即所谓“功能性”膜电荷减少。国外有学者证实NS患儿血小板及肾小球阴电荷量亦呈同步减少[2，6]。从以上几种生物膜电荷变化的一致性似可推论，NS可能是一种全身性生物膜电荷变化性疾病，其蛋白尿发生的部分原因可能是肾小球阴电荷屏障被中和而使其电荷屏障功能受损所致。
3.2 NS患儿血液流变学变化 血液做为一种非牛顿液体，在血管内流动受血管因素、血球因素及血浆因素的影响。NS时由于存在蛋白质及脂质代谢紊乱，同时多伴有高凝血症，具备了血流异常的条件，本研究结果亦证实NS患儿血液呈现高粘滞、高聚集、高浓缩状态。一般认为，RBC聚集性受多种因素的影响，包括膜的理化结构，静电荷与静电力、大分子的存在及其体积与活性[7，9]，其中主要因素是RBC表面电荷及RBC之间大分子蛋白的长链桥接。NS时由于静电斥力减弱，致RBC聚集能力大大增强，全血粘度随之升高[10]。此外，血浆粘度增高、红血球压积增高、高脂血症等均是高血粘度的促成因素。
3.3 肾病综合征蛋白尿的影响因素 本文对肾病患儿尿蛋白量的多元逐步回归分析证实，RBC膜电荷含量、血液粘度、血浆粘度对患儿的尿蛋白量均有影响，其影响力大小依次为RBC膜AB结合量，血浆粘度及全血粘度。NS时血液呈高粘滞状态已如前述，而血液粘度的增高往往导致循环减缓以及组织氧饱和程度的降低。Simpson[8]曾提出假说：高血粘度可引起肾小球毛细血管后阻力增加，从而导致肾小球内压力增高，血浆蛋白透过GBM导致蛋白尿，本文对尿蛋白的多因素分析亦支持此观点。
综上所述，肾小球滤过膜电荷含量减少导致蛋白尿，而血细胞膜电荷含量减少可使血细胞聚集能力增强，加之蛋白尿所致的血浆蛋白成分改变，高脂血症及血液浓缩等因素又可使血液呈现高粘滞状态，而高粘血症又可进一步加重蛋白尿，由此产生恶性循环。因此，设法恢复肾小球电荷屏障功能，纠正血流变异常对于减轻蛋白尿，改善血流状态，减少并发症，恢复肾功能具重要意义。
基金项目：陕西省自然科学基金资助项目(No.96SM44)
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(收稿日期:1999-12-14 修回日期：2000-01-25)
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