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编号:10779740
K562细胞cDNA表达文库的构建和鉴定
http://www.100md.com 陈刚. 张王刚. 付杰. 李福洋. 刘新平. 药立波
    参见附件(98kb)。

     陈刚. 张王刚. 付杰. 李福洋. 刘新平. 药立波

    西安交通大学第二医院血液内科 . 西安交通大学第二医院感染科. 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室. 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 陕西西安710004 . 陕西西安710032

    【关键词】

    白血病. K562细胞. cDNA文库

    【发表年期页】

    2003,2; 109-111

    【摘要】

    目的 构建K5 6 2细胞表达型cDNA文库。方法 提取K5 6 2细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5’端 ,Sephacryl S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与去磷酸化的λgt11噬菌体连接 ,体外包装后建成cDNA文库。取出 1μL倍比稀释感染E .coliY10 90 ,测定文库大小、重组率 ,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果 构建成含 1.0 2× 10 6重组子的K5 6 2细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.3kb。结论 所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。

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