重组人突变型471TNF-α及野生型TNF-α的表达及活性初步鉴定

http://www.100md.com 李瑶琛. 孔令洪. 王一理. 尚宁宽.

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     李瑶琛. 孔令洪. 王一理. 尚宁宽. 耿宜萍. 司履生

    西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室. 西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室 西安710061

    【关键词】

    TNF-α. 突变体. 蛋白表达

    【发表年期页】

    2003,1; 14-16,29

    【摘要】

    目的 采用原核表达系统 ,表达人突变型 471TNF α蛋白 ,并检测其生物学活性。方法 采用PCR技术扩增突变型 471TNF α及野生型TNF αcDNA片段 ,克隆入中间载体pUCm T中 ,并测序证实。以限制性内切酶切下目的片段 ,克隆入pBV2 2 0中 ,转入大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达野生型及突变型 471TNF α蛋白。初步纯化蛋白后 ,采用MTT法评估两者对L92 9细胞的杀伤作用。结果 ①获得了测序正确的野生型TNF α及突变型 471TNF α的cDNA克隆 ;②构建了正常人野生型TNF α及突变型 471TNF α重组表达质粒 ;③经温度诱导 ,TNF α及突变型 471TNF α蛋白均获得了表达

    http://www.100md.com/html/DirDu/2005/10/13/77/91/08.htm

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