人脑胶质瘤组织中PCNA表达与病理分级、患者预后的相关性研究
http://www.100md.com
屈建强. 杨庆余. 师蔚. 王康敏. 黄莺.
参见附件(219kb)。
作者：屈建强 杨庆余 师蔚 王康敏 黄莺
单位：(西安医科大学第二附属医院神经外科 西安 710004)
关键词：PCNA；胶质瘤；预后
西安医科大学学报000121 摘要 用免疫组化法对50例人脑星形胶质细胞瘤组织中的P CNA表达，及其与肿瘤临床病理学特征和患者预后的关系作了分析，取10例正常脑组织作对 照。结果显示，人脑星形胶质细胞瘤组织中PCNA阳性表达显著高于对照组，染色强弱与肿瘤 的病理分级呈正相关，而与预后呈负相关。提示检测肿瘤组织中PCNA表达能快速、准确地 反 映肿瘤细胞的增殖状态及评估患者预后，有望成为临床判定胶质瘤恶性程度及患者预后的重 要指标。
中图分类号 R730.264 文献标识码 A
文章编号 0258-0659(2000)01-005 4-02
Relationship between PCNA expression with tumor pathological grade and prognosis in human brain glioma
Qu Jianqiang, Yang Qingyu, Shi Wei et al
(Department of Neurosurgery, Second Affiliated Hospital,Xi′an Medic al University, Xi′an 710004,China)
ABSTRACT The appearance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was analysised in 50 biopsy-specimens of human brain astrocytoglioma and 10 normal brain tissues by immunohistochemical method, and the relationship bet ween PCNA expression and the clinical pathological characteristic, as well as th e prognosis of patients with tumors were observed.The result showed that the exp ression of PCNA in tumor tissue was significantly stronger than that of in the n o rmal tissue, while staining of tumor tissues was positively correlated with tumo r grade.But there was negatively connection between staining of tumor tissues an d outcome of patients with tumors.It suggests that the detection of PCNA express i on in tumor tissues can show the proliferating station of tumor cells and assess patient's prognosis rapidly and precisely.The appearance of PCNA can be used as an important index of assessing the malignant degree and the prognosis of human glioma.
KEY WORDS PCNA glioma prognosis
长期以来，胶质瘤的诊治一直困扰着神经外科医生，随着分 子 生物学的飞速发展，肿瘤被认为是一类涉及多种基因突变的疾病，其中增殖细胞核抗原(Pro liferating cell nuclear antigen, PCNA)的合成和表达与细胞增殖状态有关[1] ，我们通过研究PCNA在胶质瘤及正常脑组织中的表达，以了解细胞的增殖分化状态，明确其 与胶质瘤的病理分级的关系，揭示其生物学行为，为胶质瘤的诊断及预后估计提供依据。
1 材料与方法
1.1 标本采集 我院1985～1989年期间收治的随访资料完整 的50例星形胶质瘤患者，并经手术病理证实。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包 埋后存档，术前均未行放疗或化疗，按病理学分级标准：Ⅰ级18例，Ⅱ级20例，Ⅲ～Ⅳ级12 例，另取10例正常脑组织作为对照组，每个标本作连续切片，制成5μm厚备用。
1.2 抗体与试剂 第一单抗PCNA(PC-10，1∶50)为 丹麦Dako公司产品，第二单抗生物素标记的马抗鼠免疫球蛋白和ABC药盒均为美国Vector公 司产品。
1.3 免疫组化染色 将切片常规脱蜡、水化，放入0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液中，在功率为600W的微波炉中高档处理10min (5min×2)，10% 马血清 封闭 20 min，TBS 缓冲液振洗 3次 5min/次，加入二抗， 37℃ 30min,加入ABC复合物，37℃ 30min，DAB显色，苏木素淡染，封片。用已知结 肠癌阳性切片作为阳性对照，以TBS代替一抗作为阴性对照。
1.4 观察方法 PCNA阳性着色表现为胞核被染成棕黄色 或棕褐色，高倍镜下呈细颗粒状。由两人重复连续观察10个高倍视野，计每个高倍视野100 个肿瘤细胞中的阳性细胞数取其平均值，分为4级：阳性细胞数<25%为+，25%～50%为
，50%～75%为
，>75%为
。
统计方法选用Ridit合并频数和Kenda(等级相关检验)。
2 结 果
PCNA免疫组化染色结果，正常脑组织切片未见表达，而肿瘤切片中有阳性反应，表现为肿瘤 细胞核被染成棕褐色(见附图)，PCNA表达与组织学分级呈显著性正相关，而与预后呈负相关 。见表1，2。
附图 星形胶质瘤Ⅲ级，PCNA阳性染色位于胞核 ×400
表1 PCNA表达与胶质瘤分级的关系 分级
阳性细胞检 出数(n)
+
++
+++
++++
n
Ⅰ
16
2
18
Ⅱ
3
14
3
20
Ⅲ～Ⅳ
2
5
5
12
注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ级间比较P<0.01表2 PCNA表达与患者预后的关系 PCNA分类
1年内
死亡
1～3年
死亡
3～5年
死亡
>5年
死亡
PCNA低表达组
3
16
10
8
PCNA高表达组
10
2
1
0
注：表中以PCNA细胞检出率数(+)～(++)为低表达组，(+++)～(++++)为高表达组，K=- 0.499,95%可信限为[-0.293,-0.705]
3 讨 论
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种仅在增殖细胞中合成与表达的36KD的多肽，是DNA聚合酶delta 的辅助成分[1]。其合成与细胞的增殖周期有关，用Ki-67、H-TdR、Brdu及流式 细胞仪分析的结果表明，PCNA与细胞增殖状态高度相关，可作为S期的特异性标记[2 ，3]。
作者用免疫组化法检测肿瘤细胞中的PCNA，证明星形胶质细胞瘤Ⅰ～Ⅳ级间与PCNA阳性表达 呈显著正相关(P<0.01)，即随星形胶质细胞瘤的组织学分级的增高，而PCNA表达程度强 烈，说明PCNA表达与星形胶质细胞瘤的恶性行为相关。与Barbareschi观点相同[4] 。
同时将检测肿瘤细胞中的PCNA与患者的预后进行比较，发现PCNA的检测可以反映患者的预后 情况，并呈负相关(K=-0.499,95%可信限为[-0.293,-0.705])，即PCNA的阳性率越 高，患者预后越差。
另外在研究中发现2例组织学分级为Ⅲ、Ⅳ级的患者，预后分别为4年、2.5年，PCNA均为低 表达，而1例组织学分级为Ⅱ级的患者生存不足1年，但PCNA为高表达。这几例患者的肿瘤细 胞中PCNA表达愈强烈，预后越差，与传统的病理学分级相矛盾。分析以往的病理学分级仅根 据细胞学形态和核分裂像来粗略评价肿瘤的增强状态[5]，但由于肿瘤的异质性， 加之其核内多肽类物质的产生要早于核形态的改变，仅根据形态学分化程度的标准难以准确 判断肿瘤的生物学行为。而免疫组化能避免上述许多不利的主观因素，从分子生物学水平来 评估其分化状态，较传统的病理学分级准确，且简便易行。
参考文献
1.Bravo R, Frank R,Blundell PA et al.Cyclin/PCNA is the a uxi liary protein of DNA polymerase-delta[J].Nature, 1987;326(6112)∶515
2.Ogata K, Kurki P,Celis JE et al.Monoclonal antibodies to a nuclear pr otein (PCNA/Cyclin) associated with DNA replication[J].Exp Cell Res, 1987;168( 2)∶475
3.Van Dierendonck,Wisman JH,Keijxer R et al.Cell cycle-related sta inin g patterns of anti-proliferating cell nuclear antigen monoclonal antibodies ,c omrarison with Brdurd labelling and Ki-67 staining[J].Am J Pathol,1991;138(5) ∶1165
4.Barbareschi M,Iuzzoline P, Pennella Aet al.p53 protein expressio n in central nervous system neoplasm[J].Clin Pathol, 1992;45(3)∶583
5.Galand P,Degvaef C.Cyclin/PCNA immuno-staining as an alternative to t ritiated thymdine pulse labelling for making 5 phase cells in paraffin section f rom animal and human tissues[J].Cell Tissue Kinet, 1989;22(2)∶383
(1999-04-01收稿 1999-09-07修回)
作者：屈建强 杨庆余 师蔚 王康敏 黄莺
单位：(西安医科大学第二附属医院神经外科 西安 710004)
关键词：PCNA；胶质瘤；预后
西安医科大学学报000121 摘要 用免疫组化法对50例人脑星形胶质细胞瘤组织中的P CNA表达，及其与肿瘤临床病理学特征和患者预后的关系作了分析，取10例正常脑组织作对 照。结果显示，人脑星形胶质细胞瘤组织中PCNA阳性表达显著高于对照组，染色强弱与肿瘤 的病理分级呈正相关，而与预后呈负相关。提示检测肿瘤组织中PCNA表达能快速、准确地 反 映肿瘤细胞的增殖状态及评估患者预后，有望成为临床判定胶质瘤恶性程度及患者预后的重 要指标。
中图分类号 R730.264 文献标识码 A
文章编号 0258-0659(2000)01-005 4-02
Relationship between PCNA expression with tumor pathological grade and prognosis in human brain glioma
Qu Jianqiang, Yang Qingyu, Shi Wei et al
(Department of Neurosurgery, Second Affiliated Hospital,Xi′an Medic al University, Xi′an 710004,China)
ABSTRACT The appearance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was analysised in 50 biopsy-specimens of human brain astrocytoglioma and 10 normal brain tissues by immunohistochemical method, and the relationship bet ween PCNA expression and the clinical pathological characteristic, as well as th e prognosis of patients with tumors were observed.The result showed that the exp ression of PCNA in tumor tissue was significantly stronger than that of in the n o rmal tissue, while staining of tumor tissues was positively correlated with tumo r grade.But there was negatively connection between staining of tumor tissues an d outcome of patients with tumors.It suggests that the detection of PCNA express i on in tumor tissues can show the proliferating station of tumor cells and assess patient's prognosis rapidly and precisely.The appearance of PCNA can be used as an important index of assessing the malignant degree and the prognosis of human glioma.
KEY WORDS PCNA glioma prognosis
长期以来，胶质瘤的诊治一直困扰着神经外科医生，随着分 子 生物学的飞速发展，肿瘤被认为是一类涉及多种基因突变的疾病，其中增殖细胞核抗原(Pro liferating cell nuclear antigen, PCNA)的合成和表达与细胞增殖状态有关[1] ，我们通过研究PCNA在胶质瘤及正常脑组织中的表达，以了解细胞的增殖分化状态，明确其 与胶质瘤的病理分级的关系，揭示其生物学行为，为胶质瘤的诊断及预后估计提供依据。
1 材料与方法
1.1 标本采集 我院1985～1989年期间收治的随访资料完整 的50例星形胶质瘤患者，并经手术病理证实。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包 埋后存档，术前均未行放疗或化疗，按病理学分级标准：Ⅰ级18例，Ⅱ级20例，Ⅲ～Ⅳ级12 例，另取10例正常脑组织作为对照组，每个标本作连续切片，制成5μm厚备用。
1.2 抗体与试剂 第一单抗PCNA(PC-10，1∶50)为 丹麦Dako公司产品，第二单抗生物素标记的马抗鼠免疫球蛋白和ABC药盒均为美国Vector公 司产品。
1.3 免疫组化染色 将切片常规脱蜡、水化，放入0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液中，在功率为600W的微波炉中高档处理10min (5min×2)，10% 马血清 封闭 20 min，TBS 缓冲液振洗 3次 5min/次，加入二抗， 37℃ 30min,加入ABC复合物，37℃ 30min，DAB显色，苏木素淡染，封片。用已知结 肠癌阳性切片作为阳性对照，以TBS代替一抗作为阴性对照。
1.4 观察方法 PCNA阳性着色表现为胞核被染成棕黄色 或棕褐色，高倍镜下呈细颗粒状。由两人重复连续观察10个高倍视野，计每个高倍视野100 个肿瘤细胞中的阳性细胞数取其平均值，分为4级：阳性细胞数<25%为+，25%～50%为
，50%～75%为，>75%为。统计方法选用Ridit合并频数和Kenda(等级相关检验)。
2 结 果
PCNA免疫组化染色结果，正常脑组织切片未见表达，而肿瘤切片中有阳性反应，表现为肿瘤 细胞核被染成棕褐色(见附图)，PCNA表达与组织学分级呈显著性正相关，而与预后呈负相关 。见表1，2。
附图 星形胶质瘤Ⅲ级，PCNA阳性染色位于胞核 ×400
表1 PCNA表达与胶质瘤分级的关系 分级
阳性细胞检 出数(n)
+
++
+++
++++
n
Ⅰ
16
2
18
Ⅱ
3
14
3
20
Ⅲ～Ⅳ
2
5
5
12
注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ级间比较P<0.01表2 PCNA表达与患者预后的关系 PCNA分类
1年内
死亡
1～3年
死亡
3～5年
死亡
>5年
死亡
PCNA低表达组
3
16
10
8
PCNA高表达组
10
2
1
0
注：表中以PCNA细胞检出率数(+)～(++)为低表达组，(+++)～(++++)为高表达组，K=- 0.499,95%可信限为[-0.293,-0.705]
3 讨 论
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种仅在增殖细胞中合成与表达的36KD的多肽，是DNA聚合酶delta 的辅助成分[1]。其合成与细胞的增殖周期有关，用Ki-67、H-TdR、Brdu及流式 细胞仪分析的结果表明，PCNA与细胞增殖状态高度相关，可作为S期的特异性标记[2 ，3]。
作者用免疫组化法检测肿瘤细胞中的PCNA，证明星形胶质细胞瘤Ⅰ～Ⅳ级间与PCNA阳性表达 呈显著正相关(P<0.01)，即随星形胶质细胞瘤的组织学分级的增高，而PCNA表达程度强 烈，说明PCNA表达与星形胶质细胞瘤的恶性行为相关。与Barbareschi观点相同[4] 。
同时将检测肿瘤细胞中的PCNA与患者的预后进行比较，发现PCNA的检测可以反映患者的预后 情况，并呈负相关(K=-0.499,95%可信限为[-0.293,-0.705])，即PCNA的阳性率越 高，患者预后越差。
另外在研究中发现2例组织学分级为Ⅲ、Ⅳ级的患者，预后分别为4年、2.5年，PCNA均为低 表达，而1例组织学分级为Ⅱ级的患者生存不足1年，但PCNA为高表达。这几例患者的肿瘤细 胞中PCNA表达愈强烈，预后越差，与传统的病理学分级相矛盾。分析以往的病理学分级仅根 据细胞学形态和核分裂像来粗略评价肿瘤的增强状态[5]，但由于肿瘤的异质性， 加之其核内多肽类物质的产生要早于核形态的改变，仅根据形态学分化程度的标准难以准确 判断肿瘤的生物学行为。而免疫组化能避免上述许多不利的主观因素，从分子生物学水平来 评估其分化状态，较传统的病理学分级准确，且简便易行。
参考文献
1.Bravo R, Frank R,Blundell PA et al.Cyclin/PCNA is the a uxi liary protein of DNA polymerase-delta[J].Nature, 1987;326(6112)∶515
2.Ogata K, Kurki P,Celis JE et al.Monoclonal antibodies to a nuclear pr otein (PCNA/Cyclin) associated with DNA replication[J].Exp Cell Res, 1987;168( 2)∶475
3.Van Dierendonck,Wisman JH,Keijxer R et al.Cell cycle-related sta inin g patterns of anti-proliferating cell nuclear antigen monoclonal antibodies ,c omrarison with Brdurd labelling and Ki-67 staining[J].Am J Pathol,1991;138(5) ∶1165
4.Barbareschi M,Iuzzoline P, Pennella Aet al.p53 protein expressio n in central nervous system neoplasm[J].Clin Pathol, 1992;45(3)∶583
5.Galand P,Degvaef C.Cyclin/PCNA immuno-staining as an alternative to t ritiated thymdine pulse labelling for making 5 phase cells in paraffin section f rom animal and human tissues[J].Cell Tissue Kinet, 1989;22(2)∶383
(1999-04-01收稿 1999-09-07修回)
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(219kb)。