猴细小病毒Vp2的克隆、表达和鉴定
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刘正稳. Kevin E Brown. 楚雍烈
参见附件(236kb)。
刘正稳. Kevin E Brown. 楚雍烈
西安交通大学第一医院传染科. Virus Discovery Group. 西安交通大学医学院微生物学教研室 陕西西安710061 . NHLBI. NIH. Bethesda. MD208921652
【关键词】
猴细小病毒. 基因克隆. 蛋白表达.
【发表年期页】
2004,2; 0
【摘要】
目的克隆、表达和鉴定猴细小病毒(simianparvovirus,SPV)Vp2蛋白。方法用设计的SPVVp2区的特异性引物,PCR法扩增SPVVp2基因DNA片断;将获得的基因片断插入pThioHisA载体中,转化大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶酶切和核酸序列分析技术鉴定重组质粒;以LB培养液培养转化有插入SPVVp2基因的pThioHisA载体的大肠杆菌,以终浓度1mmol?L-1的IPTG诱导蛋白的表达;用SDAPAGE和Westernblot分析和鉴定表达的蛋白。结果经限制性内切酶酶切和核酸序列分析,获得了插入pThioHisA载体框架的SPVVp2基因的表达质粒;阳性转化大肠杆菌在IPTG诱导下获得了SPVVp2
刘正稳. Kevin E Brown. 楚雍烈
西安交通大学第一医院传染科. Virus Discovery Group. 西安交通大学医学院微生物学教研室 陕西西安710061 . NHLBI. NIH. Bethesda. MD208921652
【关键词】
猴细小病毒. 基因克隆. 蛋白表达.
【发表年期页】
2004,2; 0
【摘要】
目的克隆、表达和鉴定猴细小病毒(simianparvovirus,SPV)Vp2蛋白。方法用设计的SPVVp2区的特异性引物,PCR法扩增SPVVp2基因DNA片断;将获得的基因片断插入pThioHisA载体中,转化大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶酶切和核酸序列分析技术鉴定重组质粒;以LB培养液培养转化有插入SPVVp2基因的pThioHisA载体的大肠杆菌,以终浓度1mmol?L-1的IPTG诱导蛋白的表达;用SDAPAGE和Westernblot分析和鉴定表达的蛋白。结果经限制性内切酶酶切和核酸序列分析,获得了插入pThioHisA载体框架的SPVVp2基因的表达质粒;阳性转化大肠杆菌在IPTG诱导下获得了SPVVp2
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