微生物生长曲线在胆固醇结石细菌检测中的应用
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卢云. 石景森. 卓健生. 韩文胜.
参见附件(163kb)。
作者：卢云 石景森 韩文胜 卓健生
单位：卢云(青岛大学医学院附属医院外科)；石景森 韩文胜(西安医科大学第一附属医院肝胆外科研究室 西安 710061)；卓健生(第一附属医院检验科)
关键词：
西安医科大学学报000238 中图分类号 R446.5 文献标识码 D 文章编号 0258-0659(2000)02-0185-02
细菌与胆固醇结石间的联系日益引起重视，通过聚合酶链反应已测得胆固醇结石中86.67%有细菌DNA存在，但细菌培养阳性率极低，如何改进培养技术，提高阳性率成为探讨细菌与 胆固醇结石联系的关键，本实验用微生物自动检测鉴定仪，于细菌生长曲线对数生长期行转 种培养，在一定程度上提高了细菌的阳性检出率。
1 材料与方法
选1997年10月～1998年4月间胆囊结石标本，男9例，女33例，平均年龄41岁(21～6 8岁)，均为有症状择期胆囊切除的患者，用硫磷铁法证实均为以胆固醇为主混合性结石，实 验仪器BacT/Alert 120微生物检测仪和SCEPTOR微生物鉴定仪。
无菌取胆固醇结石核心样品，研磨制成5～10ml悬浊液，注入增菌瓶恒温振荡自动培养1～ 6d,底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出转种，培养6d为阴 性者视为阴性瓶取出，阳性瓶转种培养8h后取出，制备108/ml标准菌悬液，取10μl放入 10ml增菌管内，转种到SCEPTOR细菌鉴定板，厌氧培养48h后，直接在SCEPTOR微生物鉴定仪 中确定细菌菌种(需氧菌缩短为24h)。
2 结 果
42例胆石核心细菌培养后，单独分离到厌氧菌2例，未单独分离到需氧菌，同时分 离到厌氧及需氧菌者5例，细菌总检出率为16.7%(7/42) ，共分离到细菌12株，其中厌氧菌 7株，需氧菌5株，7株厌氧菌分归3个属：梭菌、丙酸杆菌、厌氧性链球菌，其中梭菌属4株 ，占厌氧菌株的57.1%。需氧菌包括大肠埃希菌3株，粪链球菌和肠链球菌各1株。
3 讨 论
80年代我们曾用传统方法行胆石核心细菌培养，44例胆囊结石中仅2例阳性，而本 实验采用BacT/Alert 120微生物检测系统，它所提供的微生物生长曲线为直接观察细菌生长 情况，选择恰当时间转种培养，为提高阳性培养率提供了有效手段，在微生物生长曲线四个 时期中，迟缓期阳性率低；对数生长期细菌大量繁殖，细菌反应单位数以对数方式上升，此 时培养阳性率最高，此期厌氧菌可维持6～24h，需氧菌仅为5～12h，在稳定期行转种培 养仍可维持一定阳性率，但较前已有一定降低，而一旦进入衰退期，多数细菌已死亡，可出 现假阴性。本组所用Back/Alert增菌瓶中所含胰消化酪蛋白酶等化学成份，根据NCCLS标准 配制，对各种细菌提供的增菌环境远优于各种肉汤培养液。菌种鉴定中本组使用SCEPTOR微 生物鉴定系统自动鉴定，避免各种生化鉴定条所致系统误差。
本组50%以上的厌氧菌株属梭菌属，该属类细菌因含芽胞，抵抗力强，能长期耐受恶劣条件 ，一旦条件适应即可出芽繁殖，这也许是该细菌能存在于胆固醇结石核心的首要条件，本实 验培养出4株产气荚膜梭菌，首次怀疑为研磨污染所致，二次将研磨环氧乙烷消毒后增菌培 养，出现同样结果。说明有可重复性。该菌非严重厌氧，生长繁殖的温度较广，37℃时分裂 繁殖周期仅8min，常超过其它混合感染细菌而占主导地位，更重要的是它可产生10余种外毒 素，其中α毒素具有活性卵磷脂酶能消耗底物卵磷脂，使其减少，这也许是产气荚膜梭菌成 为胆固醇结石核心的关键。
作者：卢云 石景森 韩文胜 卓健生
单位：卢云(青岛大学医学院附属医院外科)；石景森 韩文胜(西安医科大学第一附属医院肝胆外科研究室 西安 710061)；卓健生(第一附属医院检验科)
关键词：
西安医科大学学报000238 中图分类号 R446.5 文献标识码 D 文章编号 0258-0659(2000)02-0185-02
细菌与胆固醇结石间的联系日益引起重视，通过聚合酶链反应已测得胆固醇结石中86.67%有细菌DNA存在，但细菌培养阳性率极低，如何改进培养技术，提高阳性率成为探讨细菌与 胆固醇结石联系的关键，本实验用微生物自动检测鉴定仪，于细菌生长曲线对数生长期行转 种培养，在一定程度上提高了细菌的阳性检出率。
1 材料与方法
选1997年10月～1998年4月间胆囊结石标本，男9例，女33例，平均年龄41岁(21～6 8岁)，均为有症状择期胆囊切除的患者，用硫磷铁法证实均为以胆固醇为主混合性结石，实 验仪器BacT/Alert 120微生物检测仪和SCEPTOR微生物鉴定仪。
无菌取胆固醇结石核心样品，研磨制成5～10ml悬浊液，注入增菌瓶恒温振荡自动培养1～ 6d,底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出转种，培养6d为阴 性者视为阴性瓶取出，阳性瓶转种培养8h后取出，制备108/ml标准菌悬液，取10μl放入 10ml增菌管内，转种到SCEPTOR细菌鉴定板，厌氧培养48h后，直接在SCEPTOR微生物鉴定仪 中确定细菌菌种(需氧菌缩短为24h)。
2 结 果
42例胆石核心细菌培养后，单独分离到厌氧菌2例，未单独分离到需氧菌，同时分 离到厌氧及需氧菌者5例，细菌总检出率为16.7%(7/42) ，共分离到细菌12株，其中厌氧菌 7株，需氧菌5株，7株厌氧菌分归3个属：梭菌、丙酸杆菌、厌氧性链球菌，其中梭菌属4株 ，占厌氧菌株的57.1%。需氧菌包括大肠埃希菌3株，粪链球菌和肠链球菌各1株。
3 讨 论
80年代我们曾用传统方法行胆石核心细菌培养，44例胆囊结石中仅2例阳性，而本 实验采用BacT/Alert 120微生物检测系统，它所提供的微生物生长曲线为直接观察细菌生长 情况，选择恰当时间转种培养，为提高阳性培养率提供了有效手段，在微生物生长曲线四个 时期中，迟缓期阳性率低；对数生长期细菌大量繁殖，细菌反应单位数以对数方式上升，此 时培养阳性率最高，此期厌氧菌可维持6～24h，需氧菌仅为5～12h，在稳定期行转种培 养仍可维持一定阳性率，但较前已有一定降低，而一旦进入衰退期，多数细菌已死亡，可出 现假阴性。本组所用Back/Alert增菌瓶中所含胰消化酪蛋白酶等化学成份，根据NCCLS标准 配制，对各种细菌提供的增菌环境远优于各种肉汤培养液。菌种鉴定中本组使用SCEPTOR微 生物鉴定系统自动鉴定，避免各种生化鉴定条所致系统误差。
本组50%以上的厌氧菌株属梭菌属，该属类细菌因含芽胞，抵抗力强，能长期耐受恶劣条件 ，一旦条件适应即可出芽繁殖，这也许是该细菌能存在于胆固醇结石核心的首要条件，本实 验培养出4株产气荚膜梭菌，首次怀疑为研磨污染所致，二次将研磨环氧乙烷消毒后增菌培 养，出现同样结果。说明有可重复性。该菌非严重厌氧，生长繁殖的温度较广，37℃时分裂 繁殖周期仅8min，常超过其它混合感染细菌而占主导地位，更重要的是它可产生10余种外毒 素，其中α毒素具有活性卵磷脂酶能消耗底物卵磷脂，使其减少，这也许是产气荚膜梭菌成 为胆固醇结石核心的关键。
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