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编号:10779706
胆囊结石患者胆汁中厌氧菌谱的检测
http://www.100md.com 卢云. 石景森. 卓健生. 韩文胜. 刘刚.
    参见附件(176kb)。

     作者:卢云石景森 卓健生韩文胜 刘刚

    单位:卢云(青岛医学院附属医院普外科 266003);卓健生(西安交通大学第一医院检验科);石景森 韩文胜 刘刚(西安交通大学第一医院肝胆外科研究室,西安 710061)

    关键词:胆结石;厌氧菌;胆汁

    西安医科大学学报000318摘 要:对59例胆结石患者胆汁进行厌氧培养及自动检测分析。结果厌氧菌检出率为52.5%(31/59),其中4例专性厌氧。厌氧菌株中以脆弱类杆菌为主(37.8%)。通过该研究认为胆结石的形成可能与厌氧菌感染存在联系;专性厌氧菌感染具有病史长,抗菌治疗效果差的特点。

    中图分类号:R657.4+2;R378 文献标识码:A

    文章编号:0258-0659(2000)03-0245-02

    Detection of bile anaerobic bacteria

    in patients with gallstone

    Lu Yun,Shi Jingsen,Zhuo Jiansheng

    (Department of Hepatol-Biliary Surgery, First Hospital,Xi′an Jiaotong University, Xi′an 710061 ,China)

    ABSTRACT:In order to detect bile anaerobic bacteria in patients with gallstone, anaerobic bile culture underwent by microbile detection system in 59 gallstone patients who had cholecystectomy.The ratio of anaerobic bacteria to total patients examined was 52.5%(31/59), 4 cases with anaerobic bile culture positive only were found also.The B.fragilis was the main kind of anaerobic bacteria in bile (37.8%).Culturing at logarithmic phase can improve the positive rate of anaerobic infection and gallstone formation.The patients with anaerobic bacteria positive only have two clinical characteristics:①Long history of chronic cholecystis;②Antimicrobial agents couldn’t improve the clinical symptoms.

    KEY WORDS:gallstone bacteria;anaerobic bile culture

    厌氧菌在外科感染中的作用日益引起人们的重视,外科感染中厌氧菌与需氧菌的检出比为1.1∶1[1],说明厌氧菌感染已提到与需氧菌同等重要的地位, 但有关胆道厌氧菌感染,尤其是胆结石患者胆汁厌氧菌的检测尚未见报道。本文对我院1997年10月~1998年4月间59例胆结石患者行胆囊胆汁术中穿刺厌氧培养,现报告如下。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象 因胆囊结石行胆囊切除术患者59例。男17例,女42例,年龄19~70岁,平均41.5岁。其中胆固醇混合性结石42例,胆色素混合性结石17例。

    1.2 实验仪器 (1)BACT/ALERT 120微生物检测系统(包括恒温震荡连续检测自动培养仪及数据管理系统,美国ORGANON TEKNIKA公司)。(2)SCEPTOR微生物鉴定系统(包括微生物鉴定药敏自动检测仪及数据管理系统,美国BECTON DICKINSON公司)。

    1.3 方法 ①标本采集:术中用一次性无菌注射器穿刺病变胆囊,取胆汁5~10ml,1min内注入BACK/ALERT厌氧增菌瓶。②增菌:置此瓶于BACK/ALERT恒温振荡培养箱中自动培养1~6d,底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线,于对数生长期取出转种,培养6d仍为阴性者,视为厌氧菌阴性。③培养及鉴定:快速接种到厌氧琼脂板后,置厌氧罐孵育,48h后取出,制备108/ml标准厌氧菌菌悬液,取10μl放入10ml增菌管内,转种到SCEPTOR厌氧板、厌氧培养48h后,直接在SCEPTOR微生物鉴定仪中确定厌氧菌种。④厌氧菌培养同时行胆汁需氧菌培养。

    2 结果

    2.1 胆汁厌氧培养结果 59例胆囊结石患者经厌氧培养后,单独分离到厌氧菌者4例(6.8%),需氧菌者12例(20.3%),同时分离到厌氧及需氧菌者27例(45.8%)。累计厌氧菌阳性检出率为52.5%(31/50),需氧菌阳性检出率为66.1%(39/59),细菌总检出率为72.9%(43/59)。

    由附表可见,59例厌氧培养共分离到细菌83株,其中厌氧菌37株,需氧菌46株。37株厌氧菌菌株分类归8个属,脆弱类杆菌(B.fragilis)有14株,占厌氧菌株总数的37.8%(14/37)。

    附表 59例胆结石患者胆汁厌氧培养细菌鉴定结果 厌氧菌

    株数

    需氧菌

    株数

    革兰阴性杆菌

    革兰阴性杆菌

    脆弱类杆菌

    14

    大肠埃希菌

    17

    变形梭形菌

    2

    肺炎克雷白菌

    4

    革兰阳性杆菌

    鼻臭克雷白菌

    1

    座疮丙酸杆菌

    3

    费氏枸椽酸杆菌

    2

    贪婪丙酸杆菌

    2

    绿脓假单胞菌

    2

    颗粒丙酸杆菌

    2

    变形杆菌

    6

    艰难梭菌

    2

    哈夫尼亚杆菌

    2

    产气荚膜梭菌

    5

    产气肠杆菌

    1

    放线杆菌

    1

    革兰阳性球菌

    革兰阴性球菌

    金黄色葡萄球菌

    5

    小韦荣球菌

    1

    肠球菌

    1

    革兰阳性球菌

    2

    粪链球菌

    5

    厌氧消化链球菌

    2

    厌氧性链球菌

    1

    黑色消化球菌

    合计

    37

    合计

    46

    2.2 胆结石成分与细菌感染 对59例患者的胆囊结石成分进行定性分析,其中胆固醇为主的混合性结石占71.2%(42/59),其胆汁中厌氧菌培养阳性率40.5%(17/42),需氧菌为28.6%(12/42);胆色素为主的混合性结石占28.8%(17/59),其胆汁中厌氧菌培养阳性率82.4%(14/17),需氧菌为100%(17/17)。

    3 讨论

    正常人胆汁是无菌的,尤其在胆囊胆汁中。胆道厌氧菌多是来自于胃肠道的内源性感染,由于是条件致病菌,只有在胆道需氧菌感染严重,机体免疫力降低时,厌氧菌获得适当的生长环境,才能繁殖生长,故厌氧菌感染时绝大多数并发需氧菌感染。本组中为87.1%(27/31)。二者互相协调使胆道感染病情加重,增加了病情的复杂性及难治性[2],因此胆道厌氧菌感染的问题日益引起人们关注。有关胆结石患者胆汁厌氧菌感染的研究,不仅对于结石性胆囊炎的治疗而且对于胆石成因的研究都具有一定意义。

    3.1 厌氧菌感染在胆结石形成中的作用 国外报道[8]认为主要是由于脆弱类杆菌、梭形杆菌等厌氧菌可产生与大肠杆菌相同的β-葡萄糖醛酸酶,分解结合胆红素,产生游离胆红素与钙等金属离子结合形成胆红素结石。本组胆色素混合性结石胆汁中厌氧菌阳性率为82.4%,也印证了这一点。细菌与胆固醇结石形成的联系日益受到重视[4,5],并通过套式聚合酶链反应等方法验证胆固醇结石核心有细菌DNA存在,特别是存在座疮丙酸杆菌等厌氧菌DNA。本组胆固醇混合性结石胆汁中厌氧菌阳性率为40.5%,高于其需氧菌阳性率(28.5%),这是以往所未曾注意到的,尤其是3株座疮丙酸杆菌的检出,同胆固醇结石厌氧菌DNA结果相吻合,为厌氧菌在胆固醇结石形成中的作用提供了一定的依据,有待于更进一步的探讨。

    3.2 专性厌氧菌感染特点 厌氧菌过去多采用含忍天青液的增菌瓶送检,操作复杂且标本触氧时间较长。本组采用厌氧增菌瓶术中直接注入,触氧时间不到30s,同时根据厌氧菌自动生长曲线的四个生长时期即迟缓期、对数生长期、稳定期及衰退期进行培养,在其生长最旺盛的对数生长期进行转种,极大地提高了阳性培养率。此时厌氧菌以恒定速度分裂繁殖,菌数以几何级数增长,在以活菌数对数为纵轴的生长曲线中可见迅速增长趋势。而本组以光密度单位为纵轴的曲线中,可见细菌几乎呈直线方式上升。本组观察该期时间多集中于增菌后6~24h内,此时尽管多数增菌瓶仍保持较为清亮状态,未见浑浊,但细菌培养阳性率高达95%。同时在厌氧菌株采用微生物鉴定仪自动读板鉴定,避免了使用API20/10鉴定板所导致的系统误差。本组厌氧菌均在对数生长期进行转种,培养出4例专性厌氧菌,每株均通过两次需氧实验来进行验证,其中1例艰难梭菌(C.difficile)感染病人,患慢性结石性胆囊炎6年多,曾给予多种抗生素治疗,形成伪膜性肠炎而未见缓解,较为典型。该4例专性厌氧菌病人有两个共同特点:一是均有慢性胆囊炎病史,最少2年以上;二是都曾给予多种抗生素治疗,疗效均不显著。国外学者80年代对73份胆汁厌氧培养[6],仅1份为专性厌氧,估计这与当时厌氧培养技术有关。本组曾对10份厌氧阳性胆汁,同时采用无氧忍天青增菌瓶方法,仅6份培养阳性。相信随着厌氧培养技术的改进,胆汁厌氧菌谱研究的深入,厌氧菌在胆道系统所起的作用会逐渐被揭示。

    参考文献:

    [1] 黎沾良.国内外科10年感染变迁及对策[J].实用外科杂志,1991,11(4)∶408

    [2] 石景森,邱随民,刘绍浩,等.胆汁中结合胆汁酸的高压液相色谱定量分析[J].中华实验外科杂志,1990,7(4)∶178

    [3] Tabata.Bacteria and gallstones[J].Dig Dis Sic,1981,26(3)∶218

    [4] Swidsinski A,Khilkin M,Pahlig H ,et al.Time dependent changes in the concentration and bacterial sequences found in cholesterol gallstones[J].Hepatology, 1998,27(1)∶662

    [5] 伍晓汀,肖路加,黎介寿,等.由胆固醇结石提取DNA进行套式聚合酶链反应的研究[J].中华外科杂志,1997,35(1)∶663

    [6] Jackaman FR.Bile bacteria in patients with benign bile duct stricture[J].Br J Surg, 1998,67(2)∶329

    (收稿日期:1999-09-20 修回日期:1999-12-10)

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