RD-PCR技术在酵母基因表达谱研究中的应用
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刘莉扬. 马文丽. 宋艳斌. 张宝. 郑文岭.
参见附件(156kb)。
刘莉扬. 马文丽. 宋艳斌. 张宝. 郑文岭.
西安交通大学分子生物学教研室. 第一军医大学分子生物学研究所. 广州军区总医院分子肿瘤生物研究所 西安710049 . 广州510515 . 广州510010.
【关键词】
RD-PCR. 酿酒酵母. EST.
【发表年期页】
2002,3; 0
【摘要】
目的 应用RD PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物为模板用选择性引物(在通用引物的 3’端延伸两个碱基 )作第二次PCR扩增。 5 %PAGE胶分离基因片段 ,选择单带割胶回收 ,做第三次PCR扩增 ,与载体连接 ,最后进行测序分析。结果 采用这种方法分离得到的基因片段 ,经Blast检索分析 ,确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签 (EST)。结论 RD PCR技术可以有效地分离ES
刘莉扬. 马文丽. 宋艳斌. 张宝. 郑文岭.
西安交通大学分子生物学教研室. 第一军医大学分子生物学研究所. 广州军区总医院分子肿瘤生物研究所 西安710049 . 广州510515 . 广州510010.
【关键词】
RD-PCR. 酿酒酵母. EST.
【发表年期页】
2002,3; 0
【摘要】
目的 应用RD PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物为模板用选择性引物(在通用引物的 3’端延伸两个碱基 )作第二次PCR扩增。 5 %PAGE胶分离基因片段 ,选择单带割胶回收 ,做第三次PCR扩增 ,与载体连接 ,最后进行测序分析。结果 采用这种方法分离得到的基因片段 ,经Blast检索分析 ,确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签 (EST)。结论 RD PCR技术可以有效地分离ES
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