人纤维蛋白原G/A-455(FGB)基因多态性与动脉粥样硬化血栓并发症的相关性研究
http://www.100md.com
张烨霞. 韩丽! 马西.
参见附件(191kb)。
作者：张烨霞 韩丽 马西
单位：(西安医科大学血液研究室 西安 710061)
关键词：纤维蛋白原；基因多态性；冠心病
西安医科大学学报000209 摘要 应用PCR限制性内切酶技术，检测了30例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者，20例原发性高血压(EH)患者及21例健康成人G/A-455(FGB)基因多态性，采用自动化检测系统求出血浆纤维蛋白原(Fg)浓度及Fg分子功能参数。结果显示：血浆Fg浓度升高及Fg分子功能增强都是CHD的危险因素，G/A-455基因多态性与血浆Fg浓度、Fg分子功能及CHD、EH的发病均无显著相关性。
中图分类号 R394.3 R543.3+1 文献标识码 A 文章编号 0258-0659(2000)02-0115-04
Study of correlation of human β-fibrinogen G/A-455 polymorphism and the thrombotic complications of atherosclerosis
Zhang Yexia Han Li Ma Xi
(Research Unit for Experimental hematiology,,Xi′an Medical University,Xi′an 710061,China)
ABSTRACT In this study ,the polymorphism of G/A-455 of β-fibrinogen gene(FGB) was detected in Chinese population by polymerase chain reaction(PCR) with combination of restriction endonuclease digestion,Blasma fibrinogen(Fg) was measured by the kenetic method ,which allows to estimate the Fg level and Fg molecular reactivity, 30 patients with coronary heart disease (CHD),20 patients with essential hypertension(EH) and 21 healthy adults were involved in this study.It was showed that the increased plasma Fg level and enhanced Fg molecular were both risk factors of CHD.Chinese population has the polymorphism of G/A-455 and plasma Fg level well as Fg molecular reactivity,In addition ,the polymorphism of G/A-455 (FGB) is not correlated to the risk of CHD or EH.
KEY WORDS fibrinogen gene polymorphism coronary heart disease
纤维蛋白原(Fibrinogen ,Fg)是由肝细胞合成、分泌的一种糖基化蛋白，它由三对多肽链Aα、Bβ、γ形成对称二聚体结构，Fg的三条多肽链分别由不同的基因编码，其中Bβ链的翻译和转录是Fg合成的限速性步骤。近年发现白种人Fg基因多态性与血浆Fg浓度升高及动脉粥样硬化血栓并发症发病具有相关性，从而使Fg基因多态性的研究引起广泛关注。位于Fg-Bβ基因(β-Fibrinogen gene FGB)5′端启动子区-455bp位点处的G/A-455是倍受关注的一个多态性位点。众多的Fg基因多态性及其与血浆Fg浓度，动脉粥磁硬化的血
第一附属医院血液科
栓并发症的相关性还有待于证实。对此，我们检探测了国人冠心病(CHD)和原发性高血压(EH)患者G/A-455(FGB)基因多态性，分析了G/A-455基因多态性的分布、等位基因A-455的基因频率、G/A-455基因多态性与Fg浓度及其分子功能的关系以及G/A-455基因多态性与动脉粥样硬化血栓并发症发病的关系，试图在动脉粥样硬化血栓并发症的病因、发病机理方面作一些探讨。
1 材料与方法
1.1 研究对象
CHD及EH患者均为1996年～1997年间我校第一附属医院住院患者，其中冠心病组(CHD)；30例(包括心肌梗塞7例，心绞痛23例)，男22例，女8例，年龄35～77岁，平均(57.6±10.8)岁，按WHO制定的标准经临床、心电图及(或)冠状动脉造影确定诊断；原发性高血压组(EH)：20例(均为Ⅰ、Ⅱ期)，男10例，女10例，年龄35～80岁，平均(57.9±11.1)岁，按WHO制定的标准确定诊断；对照组：21例，男13例，女8例，年龄43～70岁，平均(52.6±8.2)岁，均无心血管及其它慢性疾病史。2.2 实验方法
2.2.1 标本采集 采集空腹静脉血4ml，按血液与抗凝剂(3.8%枸橼酸钠)9∶1之比例混合后，立即离心(2 000r/30min,4℃)。收集血浆贮存于-70℃，血细胞贮存于-20℃。
2.2.2 G/A-455(FGB)基因多态性分析 常规蛋白酶K消化，采用酚-氯仿法提取DNA。每50μl LPCR反应体系含MgCl2 2.5mmol/L,4×dNTPs各0.2mmol/L,引物①、②各约200pmol/L，模板DNA 100～200ng,TaqDNA聚合酶2U，PCR热循环条件为：①95℃ 5min,②95℃ 1min,55℃ 1min,72℃ 1.5min,循环30次,③72℃ 5min。于每10μl PCR反应产物中加入1.4μl 10×c buffer(10mmol/L Tris-HCl pH 7.9,50mmol/L,NaCl 10mmol/L MgCl2 ,1mmol/L DTT),0.14μl Muti-Core buffer(25mmol/L Tris-AC pH 7.8, 10m KAC,10mmol/L MgAC2， 1mmol/L,DTT)， 10U HaeⅢ，于37℃孵育3h，将上述酶消化产物用2%琼脂糖凝胶(含溴化乙锭0.5μg/ml)在1xTBE中电泳(电压5V/cm) 40min后，紫外检测仪分析电泳结果。
已有研究证明，此PCR扩增产物应是Fg-Bβ基因-1 178bp～+12bp间，包括-455bp位点的一长为1.3kb的DNA序列。其中，有一处固定不变的HaeⅢ酶切位点，另一处则是由于-455bp(FGB)处G/A-455多态性所致的可变的HaeⅢ酶切位点，HaeⅢ将含有G-455的DNA序列(H1)消化为343bp,383bp与575bp三条片段，而将含有A-455的DNA片段(H2)消化为343bp与958bp两条片段，并由H1、H2组成三种基因型即H1H1、H1H2、H2H2[1，2]。
1.2.3 引物序列 ①5′-AAGAATTTGGGAATGCAATCTCTGCTACC5-3；②5′-CTCCTCATTGTCGTTGACACCTTGGGAC-3′。
1.2.4 血浆Fg浓度及功能测定 按Fg功能自动检测系统方法操作[3]，求出纤维蛋白原浓度(S)，纤维蛋白单体聚合速度(FMPV)，凝固性纤维蛋白原含量(用ODmax表示)及FMPV/ODmax(纤维蛋白原分子功能参数)。
1.2.5 统计学处理 除基因频率用95%CI表示，资料统计分析用χ2检验外，其余结果均以均数±标准差(
±s)表示，资料统计分析用t检验(血浆Fg浓度(S)经自然对数转换后用t检验分析)。
2 结 果
2.1 血浆Fg浓度(S)及其功能(FMPV/ODmax)
如表1所示，CHD组平均血浆Fg浓度较EH组及对照组明显增高(P<0.001)，但EH组平均血浆Fg浓度与对照组比无显著性差异(P>0.05)。CHD组及EH组FMPV/ODmax都较对照组明显增高(分别为P<0.001,P<0.002)，但CHD组与EH组平均FMPV/ODmax无显著性差异(P>0.05)。各组的平均年龄及BMI(体表面积指数，用体重/身高2表示)均无显著性差异(P>0.05)。
2.2 G/A-455基因多态性
PCR反应产物及内切酶HaeⅢ消化后的结果 见图1。
图1 G/A-455多态性
(a)PCR产物; (b)不同基因型PCR产物被HaeⅢ消化后经琼脂糖凝胶电泳结果
表1 各组血浆Fg浓度及其分子功能(±s) 组 别
例数
S(g/L)
FMPV/ODmax
年龄(岁)
BMI(kg/m2)
对照组
21
2.62±0.53
3.620±0.489
52.6±8.2
21.23±1.91
EH组
20
2.71±0.94△
4.418±0.583△△
57.9±11.1
21.82±3.88
CHD组
30
4.01±1.29△△△
4.609±0.425△△△
57.6±10.8
22.40±3.04
P值
>0.05
>0.05
与对照组相比，△P>0.05,△△P<0.002,**P<0.001
与EH组相比，*P<0.001,**P>0.05
2.3 G/A-445(FGB)基因多态性分布及等位基因A-455的基因频率
等位基因A-455在对照组、EH组、CHD组及全部研究对象中的基因频率分别为0.07(95% CI0～0.15)，0.18(95% CI 006～0.30),0.13(95% CI 0.04～0.22)及0.13(95% CI 0.07～0.18)。虽然对照组中等位基因A-455的基因频率低于后三者，但各组间无显著性差异(P<0.05)(表2)。等位基因A-455的基因频率在男、女性别间无显著性差异(P>0.05)(表3)。
2.4 不同基因型血浆Fg浓度(S)及其分子功能(FMPV/ODmax)
如表4所示，无论在CHD组、EH组、对照组内还是全部研究对象中，平均血浆Fg浓度及其FMPV/ODmax均不因是否含有等位基因A-455而有明显的统计学差异(P>0.05)。同样，各组内及全部研究对象中，平均年龄及BMI也不因是否含有等位基因A-455而有显著性差异。表2 G/A-455多态性分布及等位基因A-455的基因频率 组 别
G/G-455
G/A-455
A/A-455
合计
A-455的基因频率(95%CI)
对照组
18
3
0
21
0.07(0～0.15)
EH组
14
5
1
20
0.18(0.06～0.30)
CHD组
22
8
0
30
0.13(0.04～0.22)
合 计
54
16
1
71
0.13(0.07～0.18)
P值
>0.05
>0.05
>0.05
表3 不同性别G/A-455多态性分布及等位基因A-455的基因频率 组 别
G/G-455
G/A-455
A/A-455
合计
A-455的基因频率(95%CI)
男性
21
5
0
26
0.09(0.01～0.17)
女性
33
11
1
45
0.14(0.07～0.21)
P值
>0.05
>0.05
>0.05
表4 不同基因型血浆Fg浓度及其分子功能(±s) 组 别
基因型
例数
S(g/L)
FMPV/ODmax
年龄(岁)
BMI(kg/m2)
P值
对照组
G/G-455
18
2.63±0.54
3.620±0.416
53.6±8.6
20.85±1.58
G/A-455
3
2.62±0.47
3.510±0.224
47.0±3.6
23.5±2.5
>0.05
EH组
G/G-455
14
2.53±1.21
4.278±0.659
57.0±10.7
21.64±4.19
G/A-455+
A/A-455
6
3.05±0.37
4.723±0.410
60.0±12.7
22.20±3.37
>0.05
CHD组
G/G-455
22
3.96±1.51
4.564±0.386
58.2±10.2
22.98±2.86
G/A-455
8
4.15±1.40
4.723±0.407
56.0±10.3
20.96±3.40
>0.05
全 部
G/G-455
54
3.15±1.12
4.174±0.613
56.3±9.3
21.92±3.61
研究
对象
G/A-455+
A/A-455
17
3.49±1.13
4.513±0.610
55.8±10.9
21.85±3.31
>0.05
3 讨 论
较多的研究结果表明[1，4]，等位基因A-455对血浆Fg浓度升高具有独立作用，但Behague等及Montgomery等[5，6]的实验结果却表明，G/A-455基因多态性与血浆Fg浓度变化虽具相关性，但尚依赖于其他刺激Fg合成的因素，例如吸烟、炎症、应激反应等。与以上结论完全相反，Berg等和Cornor等分别对来自挪威、英国人群的研究结果却并未发现Fg基因的多态性与血浆Fg浓度的变化具有显著相关性[7，8]。至今尚未见到中国人Fg基因多态性与血浆Fg浓度相关性的报道。本实验结果显示，在BMI、年龄均无差异的情况下，无论在对照组、EH组、CHD组内还是全部研究对象中，G/A-455多态性都与血浆Fg浓度变化无显著相关性，P>0.05(见表4)。我们认为，在一些人群或人种中G/A-455可能是控制Fg-Bβ链合成的功能基因，也可能与一些控制Fg合成的功能基因具连锁不平衡关系，从而影响Fg的合成；而在另一些人群或人种中(如中国人)G/A-455即不是控制Fg-Bβ链合成的功能基因，也与控制Fg合成的功能基因无密切相关性，从而表现出G/A-455基因多态性与血浆Fg浓度变化无相关性。但此推测还有待于进一步深入研究。
我们的早期研究发现Fg分子功能增强也是动脉粥样硬化血栓并发症的重要危险因素[3]。本研究显示，CHD患者及EH患者均伴有Fg分子功能的增强，但Fg分子功能与G/A-455基因多态性不具有显著相关性(P>0.05)。由此我们推测G/A-455即不是控制Fg分子功能的基因，也与此类功能基因无链锁不平衡关系。
有人报道，虽然等位基因A-455与血浆Fg浓度升高具有相关性，但其升高程度并不足以引起缺血性心脏病(IHD)的危险性增高[9，10]。我们的实验结果显示(见表3)，等位基因A-455 的基因频率不因性别不同以及有无高血压、冠心病而具有显著性差异，揭示G/A-455基因多态性与EH及CHD的发病危险性无显著相关性。虽然我们的实验结果显示，G/A-455(FGB)多态性与血浆Fg浓度、Fg分子功能变化及CHD的发病危险性无相关性，但中国人别的Fg基因多态性与血浆Fg浓度、Fg分子功能及动脉粥样硬化血栓并发症是否具有相关性尚需进一步的研究。这将对动脉粥样硬化血栓并发症的病因、病理机制的研究及其防治具有重要意义。 参考文献
1，Thomas AE,Green FR, Kelleher CH et al.Variation in the promoter region of the β-fibrinogen gene is associated with plasmas firingoen levels in smokers and nonsmokers[J].Tromb and Haemost, 1991;65(5)∶487
2，Thomas A,Lamlum H,Humphries S et al.Linkage disequilibrium across the fibrinogen locus as shown by five genetic polymorphisms, G/A-455 (Hae Ⅲ),C/T-148 (Hind Ⅲ/AluI),T/G+1689(Ava Ⅱ) and Bcll (β-fibrinogen)and TaqI(α-fibrinogen) ,and their detection by PCR[J].Human Mutation, 1994;3(1)∶79
3，马西.缺血性心脑血管病的纤维蛋白原分子反应性的观察[J].中华血液杂志，1996；17(3)∶135
4，Palmeirio A,Carvalho SJ, Fewer AC et al.Polymorphism in the promoter region of the β-fibrinogen gene and fibrinogen plasma levels in an in-patient population[J].Thromb and Haemost, 1994;72(2)∶325
5，Behagun I.Poirier O,Nicaud V et al.β-fibrinogen gene polymorphisms are associated with plasma fibrinogen and coronary artery disease in patients with myocardial infarction[J].Circulation,1996;93(3)∶440
6，Montgomery HE,Clarkson P,Nwose OM ,et al.The acute rise in plasma fibrinogen concentration with exercise is influenced by the G-453-A Polymorphism of the β-fibrinogen gene[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,1996;16(3)∶386
7，Berg K,Kierulf P.DNA Polymorphisms at fibrinogen loci and plasma fibrinogen Concentration[J].Clin Genet, 1989;36(4)∶229
8，Connor JM.,Fowkes FGR, Wood J et al.Genetic Variation at firbinogen loci and plasma fibrinogen levels[J].J Med Genet, 1992;29(7)∶480
9，Scarabin PY,Bara L,Ricard S et al.Genetic variation at the β-fibrinogen locus in relation to plasma fibrinogen concentrations and risk of myocardial infarction[J].Arterioscler and Thromb, 1993;13(6)∶886
10，Tybjoerg HA,Agerholm LB,Humphries SE e al.A common mutatin G-455-A in the befa -fibrinogen promter is an independent prdeictor of plasma fibrinogen, but not of ischemic heart disease[J].J Clin Invest,1997;991(12)∶3034
(1999-9-17收稿 1999-11-20修回)
作者：张烨霞 韩丽 马西
单位：(西安医科大学血液研究室 西安 710061)
关键词：纤维蛋白原；基因多态性；冠心病
西安医科大学学报000209 摘要 应用PCR限制性内切酶技术，检测了30例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者，20例原发性高血压(EH)患者及21例健康成人G/A-455(FGB)基因多态性，采用自动化检测系统求出血浆纤维蛋白原(Fg)浓度及Fg分子功能参数。结果显示：血浆Fg浓度升高及Fg分子功能增强都是CHD的危险因素，G/A-455基因多态性与血浆Fg浓度、Fg分子功能及CHD、EH的发病均无显著相关性。
中图分类号 R394.3 R543.3+1 文献标识码 A 文章编号 0258-0659(2000)02-0115-04
Study of correlation of human β-fibrinogen G/A-455 polymorphism and the thrombotic complications of atherosclerosis
Zhang Yexia Han Li Ma Xi
(Research Unit for Experimental hematiology,,Xi′an Medical University,Xi′an 710061,China)
ABSTRACT In this study ,the polymorphism of G/A-455 of β-fibrinogen gene(FGB) was detected in Chinese population by polymerase chain reaction(PCR) with combination of restriction endonuclease digestion,Blasma fibrinogen(Fg) was measured by the kenetic method ,which allows to estimate the Fg level and Fg molecular reactivity, 30 patients with coronary heart disease (CHD),20 patients with essential hypertension(EH) and 21 healthy adults were involved in this study.It was showed that the increased plasma Fg level and enhanced Fg molecular were both risk factors of CHD.Chinese population has the polymorphism of G/A-455 and plasma Fg level well as Fg molecular reactivity,In addition ,the polymorphism of G/A-455 (FGB) is not correlated to the risk of CHD or EH.
KEY WORDS fibrinogen gene polymorphism coronary heart disease
纤维蛋白原(Fibrinogen ,Fg)是由肝细胞合成、分泌的一种糖基化蛋白，它由三对多肽链Aα、Bβ、γ形成对称二聚体结构，Fg的三条多肽链分别由不同的基因编码，其中Bβ链的翻译和转录是Fg合成的限速性步骤。近年发现白种人Fg基因多态性与血浆Fg浓度升高及动脉粥样硬化血栓并发症发病具有相关性，从而使Fg基因多态性的研究引起广泛关注。位于Fg-Bβ基因(β-Fibrinogen gene FGB)5′端启动子区-455bp位点处的G/A-455是倍受关注的一个多态性位点。众多的Fg基因多态性及其与血浆Fg浓度，动脉粥磁硬化的血
第一附属医院血液科
栓并发症的相关性还有待于证实。对此，我们检探测了国人冠心病(CHD)和原发性高血压(EH)患者G/A-455(FGB)基因多态性，分析了G/A-455基因多态性的分布、等位基因A-455的基因频率、G/A-455基因多态性与Fg浓度及其分子功能的关系以及G/A-455基因多态性与动脉粥样硬化血栓并发症发病的关系，试图在动脉粥样硬化血栓并发症的病因、发病机理方面作一些探讨。
1 材料与方法
1.1 研究对象
CHD及EH患者均为1996年～1997年间我校第一附属医院住院患者，其中冠心病组(CHD)；30例(包括心肌梗塞7例，心绞痛23例)，男22例，女8例，年龄35～77岁，平均(57.6±10.8)岁，按WHO制定的标准经临床、心电图及(或)冠状动脉造影确定诊断；原发性高血压组(EH)：20例(均为Ⅰ、Ⅱ期)，男10例，女10例，年龄35～80岁，平均(57.9±11.1)岁，按WHO制定的标准确定诊断；对照组：21例，男13例，女8例，年龄43～70岁，平均(52.6±8.2)岁，均无心血管及其它慢性疾病史。2.2 实验方法
2.2.1 标本采集 采集空腹静脉血4ml，按血液与抗凝剂(3.8%枸橼酸钠)9∶1之比例混合后，立即离心(2 000r/30min,4℃)。收集血浆贮存于-70℃，血细胞贮存于-20℃。
2.2.2 G/A-455(FGB)基因多态性分析 常规蛋白酶K消化，采用酚-氯仿法提取DNA。每50μl LPCR反应体系含MgCl2 2.5mmol/L,4×dNTPs各0.2mmol/L,引物①、②各约200pmol/L，模板DNA 100～200ng,TaqDNA聚合酶2U，PCR热循环条件为：①95℃ 5min,②95℃ 1min,55℃ 1min,72℃ 1.5min,循环30次,③72℃ 5min。于每10μl PCR反应产物中加入1.4μl 10×c buffer(10mmol/L Tris-HCl pH 7.9,50mmol/L,NaCl 10mmol/L MgCl2 ,1mmol/L DTT),0.14μl Muti-Core buffer(25mmol/L Tris-AC pH 7.8, 10m KAC,10mmol/L MgAC2， 1mmol/L,DTT)， 10U HaeⅢ，于37℃孵育3h，将上述酶消化产物用2%琼脂糖凝胶(含溴化乙锭0.5μg/ml)在1xTBE中电泳(电压5V/cm) 40min后，紫外检测仪分析电泳结果。
已有研究证明，此PCR扩增产物应是Fg-Bβ基因-1 178bp～+12bp间，包括-455bp位点的一长为1.3kb的DNA序列。其中，有一处固定不变的HaeⅢ酶切位点，另一处则是由于-455bp(FGB)处G/A-455多态性所致的可变的HaeⅢ酶切位点，HaeⅢ将含有G-455的DNA序列(H1)消化为343bp,383bp与575bp三条片段，而将含有A-455的DNA片段(H2)消化为343bp与958bp两条片段，并由H1、H2组成三种基因型即H1H1、H1H2、H2H2[1，2]。
1.2.3 引物序列 ①5′-AAGAATTTGGGAATGCAATCTCTGCTACC5-3；②5′-CTCCTCATTGTCGTTGACACCTTGGGAC-3′。
1.2.4 血浆Fg浓度及功能测定 按Fg功能自动检测系统方法操作[3]，求出纤维蛋白原浓度(S)，纤维蛋白单体聚合速度(FMPV)，凝固性纤维蛋白原含量(用ODmax表示)及FMPV/ODmax(纤维蛋白原分子功能参数)。
1.2.5 统计学处理 除基因频率用95%CI表示，资料统计分析用χ2检验外，其余结果均以均数±标准差(
±s)表示，资料统计分析用t检验(血浆Fg浓度(S)经自然对数转换后用t检验分析)。2 结 果
2.1 血浆Fg浓度(S)及其功能(FMPV/ODmax)
如表1所示，CHD组平均血浆Fg浓度较EH组及对照组明显增高(P<0.001)，但EH组平均血浆Fg浓度与对照组比无显著性差异(P>0.05)。CHD组及EH组FMPV/ODmax都较对照组明显增高(分别为P<0.001,P<0.002)，但CHD组与EH组平均FMPV/ODmax无显著性差异(P>0.05)。各组的平均年龄及BMI(体表面积指数，用体重/身高2表示)均无显著性差异(P>0.05)。
2.2 G/A-455基因多态性
PCR反应产物及内切酶HaeⅢ消化后的结果 见图1。
图1 G/A-455多态性
(a)PCR产物; (b)不同基因型PCR产物被HaeⅢ消化后经琼脂糖凝胶电泳结果
表1 各组血浆Fg浓度及其分子功能(
±s) 组 别例数
S(g/L)
FMPV/ODmax
年龄(岁)
BMI(kg/m2)
对照组
21
2.62±0.53
3.620±0.489
52.6±8.2
21.23±1.91
EH组
20
2.71±0.94△
4.418±0.583△△
57.9±11.1
21.82±3.88
CHD组
30
4.01±1.29△△△
4.609±0.425△△△
57.6±10.8
22.40±3.04
P值
>0.05
>0.05
与对照组相比，△P>0.05,△△P<0.002,**P<0.001
与EH组相比，*P<0.001,**P>0.05
2.3 G/A-445(FGB)基因多态性分布及等位基因A-455的基因频率
等位基因A-455在对照组、EH组、CHD组及全部研究对象中的基因频率分别为0.07(95% CI0～0.15)，0.18(95% CI 006～0.30),0.13(95% CI 0.04～0.22)及0.13(95% CI 0.07～0.18)。虽然对照组中等位基因A-455的基因频率低于后三者，但各组间无显著性差异(P<0.05)(表2)。等位基因A-455的基因频率在男、女性别间无显著性差异(P>0.05)(表3)。
2.4 不同基因型血浆Fg浓度(S)及其分子功能(FMPV/ODmax)
如表4所示，无论在CHD组、EH组、对照组内还是全部研究对象中，平均血浆Fg浓度及其FMPV/ODmax均不因是否含有等位基因A-455而有明显的统计学差异(P>0.05)。同样，各组内及全部研究对象中，平均年龄及BMI也不因是否含有等位基因A-455而有显著性差异。表2 G/A-455多态性分布及等位基因A-455的基因频率 组 别
G/G-455
G/A-455
A/A-455
合计
A-455的基因频率(95%CI)
对照组
18
3
0
21
0.07(0～0.15)
EH组
14
5
1
20
0.18(0.06～0.30)
CHD组
22
8
0
30
0.13(0.04～0.22)
合 计
54
16
1
71
0.13(0.07～0.18)
P值
>0.05
>0.05
>0.05
表3 不同性别G/A-455多态性分布及等位基因A-455的基因频率 组 别
G/G-455
G/A-455
A/A-455
合计
A-455的基因频率(95%CI)
男性
21
5
0
26
0.09(0.01～0.17)
女性
33
11
1
45
0.14(0.07～0.21)
P值
>0.05
>0.05
>0.05
表4 不同基因型血浆Fg浓度及其分子功能(
±s) 组 别基因型
例数
S(g/L)
FMPV/ODmax
年龄(岁)
BMI(kg/m2)
P值
对照组
G/G-455
18
2.63±0.54
3.620±0.416
53.6±8.6
20.85±1.58
G/A-455
3
2.62±0.47
3.510±0.224
47.0±3.6
23.5±2.5
>0.05
EH组
G/G-455
14
2.53±1.21
4.278±0.659
57.0±10.7
21.64±4.19
G/A-455+
A/A-455
6
3.05±0.37
4.723±0.410
60.0±12.7
22.20±3.37
>0.05
CHD组
G/G-455
22
3.96±1.51
4.564±0.386
58.2±10.2
22.98±2.86
G/A-455
8
4.15±1.40
4.723±0.407
56.0±10.3
20.96±3.40
>0.05
全 部
G/G-455
54
3.15±1.12
4.174±0.613
56.3±9.3
21.92±3.61
研究
对象
G/A-455+
A/A-455
17
3.49±1.13
4.513±0.610
55.8±10.9
21.85±3.31
>0.05
3 讨 论
较多的研究结果表明[1，4]，等位基因A-455对血浆Fg浓度升高具有独立作用，但Behague等及Montgomery等[5，6]的实验结果却表明，G/A-455基因多态性与血浆Fg浓度变化虽具相关性，但尚依赖于其他刺激Fg合成的因素，例如吸烟、炎症、应激反应等。与以上结论完全相反，Berg等和Cornor等分别对来自挪威、英国人群的研究结果却并未发现Fg基因的多态性与血浆Fg浓度的变化具有显著相关性[7，8]。至今尚未见到中国人Fg基因多态性与血浆Fg浓度相关性的报道。本实验结果显示，在BMI、年龄均无差异的情况下，无论在对照组、EH组、CHD组内还是全部研究对象中，G/A-455多态性都与血浆Fg浓度变化无显著相关性，P>0.05(见表4)。我们认为，在一些人群或人种中G/A-455可能是控制Fg-Bβ链合成的功能基因，也可能与一些控制Fg合成的功能基因具连锁不平衡关系，从而影响Fg的合成；而在另一些人群或人种中(如中国人)G/A-455即不是控制Fg-Bβ链合成的功能基因，也与控制Fg合成的功能基因无密切相关性，从而表现出G/A-455基因多态性与血浆Fg浓度变化无相关性。但此推测还有待于进一步深入研究。
我们的早期研究发现Fg分子功能增强也是动脉粥样硬化血栓并发症的重要危险因素[3]。本研究显示，CHD患者及EH患者均伴有Fg分子功能的增强，但Fg分子功能与G/A-455基因多态性不具有显著相关性(P>0.05)。由此我们推测G/A-455即不是控制Fg分子功能的基因，也与此类功能基因无链锁不平衡关系。
有人报道，虽然等位基因A-455与血浆Fg浓度升高具有相关性，但其升高程度并不足以引起缺血性心脏病(IHD)的危险性增高[9，10]。我们的实验结果显示(见表3)，等位基因A-455 的基因频率不因性别不同以及有无高血压、冠心病而具有显著性差异，揭示G/A-455基因多态性与EH及CHD的发病危险性无显著相关性。虽然我们的实验结果显示，G/A-455(FGB)多态性与血浆Fg浓度、Fg分子功能变化及CHD的发病危险性无相关性，但中国人别的Fg基因多态性与血浆Fg浓度、Fg分子功能及动脉粥样硬化血栓并发症是否具有相关性尚需进一步的研究。这将对动脉粥样硬化血栓并发症的病因、病理机制的研究及其防治具有重要意义。 参考文献
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2，Thomas A,Lamlum H,Humphries S et al.Linkage disequilibrium across the fibrinogen locus as shown by five genetic polymorphisms, G/A-455 (Hae Ⅲ),C/T-148 (Hind Ⅲ/AluI),T/G+1689(Ava Ⅱ) and Bcll (β-fibrinogen)and TaqI(α-fibrinogen) ,and their detection by PCR[J].Human Mutation, 1994;3(1)∶79
3，马西.缺血性心脑血管病的纤维蛋白原分子反应性的观察[J].中华血液杂志，1996；17(3)∶135
4，Palmeirio A,Carvalho SJ, Fewer AC et al.Polymorphism in the promoter region of the β-fibrinogen gene and fibrinogen plasma levels in an in-patient population[J].Thromb and Haemost, 1994;72(2)∶325
5，Behagun I.Poirier O,Nicaud V et al.β-fibrinogen gene polymorphisms are associated with plasma fibrinogen and coronary artery disease in patients with myocardial infarction[J].Circulation,1996;93(3)∶440
6，Montgomery HE,Clarkson P,Nwose OM ,et al.The acute rise in plasma fibrinogen concentration with exercise is influenced by the G-453-A Polymorphism of the β-fibrinogen gene[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,1996;16(3)∶386
7，Berg K,Kierulf P.DNA Polymorphisms at fibrinogen loci and plasma fibrinogen Concentration[J].Clin Genet, 1989;36(4)∶229
8，Connor JM.,Fowkes FGR, Wood J et al.Genetic Variation at firbinogen loci and plasma fibrinogen levels[J].J Med Genet, 1992;29(7)∶480
9，Scarabin PY,Bara L,Ricard S et al.Genetic variation at the β-fibrinogen locus in relation to plasma fibrinogen concentrations and risk of myocardial infarction[J].Arterioscler and Thromb, 1993;13(6)∶886
10，Tybjoerg HA,Agerholm LB,Humphries SE e al.A common mutatin G-455-A in the befa -fibrinogen promter is an independent prdeictor of plasma fibrinogen, but not of ischemic heart disease[J].J Clin Invest,1997;991(12)∶3034
(1999-9-17收稿 1999-11-20修回)
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