血小板生成素基因的克隆及在原核细胞的表达
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王怀宇. 刘陕西. 郑树. 陈念祖.
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王怀宇. 刘陕西. 郑树. 陈念祖.
西安交通大学第一医院血液科!西安710061.
【关键词】
血小板生成素. 基因表达. 分子克隆.
【发表年期页】
2000,6; 0
【摘要】
目的 克隆人血小板生成素(hTPO)基因,并使其在原核细胞中获得表达。方法 先从人胚胎肝脏中提取总RNA,进行RT-PCR获得编码氨基端195个氨基酸残基的hTPO195cDNA。将该片段亚克隆至pGEM-Teasy克隆质粒中,以双脱氧链末端终止法对克隆质粒直接测序。接着将hTPO195cDNA插入到原核表达质粒pET28-a中,转化大肠杆菌BLR21(DE3),进行诱导表达,以SDS-PAGE方法及免疫印迹法进行检测。结果 得到的hTPO195cDNA与文献报道的序列完全一致。经诱导后hTPO基因在大肠杆菌中获得表达,目的蛋白占总菌体蛋白约10%,以免疫印迹法证实表达产物正确。结论 得到hTPO195cDNA,并在
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