六种中草药活性成分的提取与活性研究
摘要：目的：提取中草药中的活性成分，研究其抑菌特性，为临床应用和水产品的防病治病提供依据。方法：用水煎煮法和乙醇提取法，提取6种中草药(草乌、南蛇藤、蒲黄、莽草、苦参和黄连素)中的活性成分。用美国临床试验室标准化委员会(NCCLS)推荐的药物敏感试验方法，检测中草药活性成分对临床常见致病细菌和真菌的抑菌效果。结果：6种中草药中，黄连素的抑菌作用最强，南蛇藤次之，草乌与苦参仅能抑制细菌的生长而对真菌没有作用，蒲黄与莽草则对细菌和真菌均无抑菌作用。结论：中草药活性成分对细菌和真菌的抑制作用取决于其化学结构及活性基因，有效地提取中草药中的活性成分对实验结果至关重要。
关键词：中草药；活性成分；提取；抑菌实验
中草药的应用在我国具有悠久的历史，其药用价值也逐渐被欧美国家所接收。为研究其抑菌特性，笔者对草乌等6种中草药进行了活性成分分离，并进行了抑菌实验。现报道如下。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1中草药草乌、南蛇藤、蒲黄、莽草、苦参、黄连，自采或购买。
1.1.2实验菌株大肠埃希菌(ATCC25922)，金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，铜绿假单胞菌(ATCC27853)，枯草杆菌，假丝酵母菌和酿酒酵母菌。由卫生部临床检验中心提供的质控菌株。
1.1.33M-H培养基药敏实验用，由杭州微生物试剂厂生产。
1.2方法
1.2.1中草药活性成分的提取方法用水煎煮法和乙醇提取法。
1.2.2草乌活性成分的提取
1.2.2.1水提取法称生草乌14 g，掰成小块后加入少量蒸馏水50 ml，用搅拌机搅成糊状。按1 g草乌∶15 ml蒸馏水的比例再将蒸馏水补充到210 ml，移至家用煮中药的瓷罐内，用定时恒温搅拌器恒温加热2 h至沸腾，其间要不断补充缺失的水分。之后徐徐蒸发至50 ml，由于这时侯的草乌提取液非常粘稠，无法用三角漏斗自然过滤，因此用离心机以7 000 r/min的速度离心25 min。将所得滤液共67 ml，取25 ml为标准样品量，以及42 ml两份。-20℃冷冻保存2 h后，在-80℃下冷藏备用。
1.2.2.2乙醇提取法首先配置25%乙醇溶液100 ml。称量10 g生草乌，掰成小块后，加入少量25%乙醇溶液(50 ml)用搅拌机搅成糊状。按照1 g草乌∶10 ml的25%乙醇溶液的比例再将乙醇补充到100 ml，浸泡48 h(其间每隔2～3 h需震荡浸液，使之充分混合)。48 h后，将浸液移至家用煮中药的瓷罐内，用定时恒温搅拌器恒温加热至60℃(注意加热时在器皿上盖一块玻璃板，防止乙醇挥发过度)。同样，这时的混合液非常粘稠，无法用三角漏斗自然过滤，用离心机以7 000 r/min离心25 min。得滤液81 ml，取25 ml为标准样品量，以及56 ml两份。-20℃冷冻保存2 h后，在-80℃下冷藏。
1.2.2.3冷冻干燥取两种提取液25 ml封装，用冻干机干燥后-20℃冷藏。
1.2.2.4取样备用所得干燥后的样品呈絮状物，极易溶于水。取出全部干燥的样品，草乌的水提取液编为1号，称量有0.108 45 g，草乌的乙醇提取液编为2号，称量有0.142 65 g。在-20℃的条件下冷藏备用。
另外5种中草药活性成分的提取过程与草乌基本相同，在此不再重复。每种中草药得两份提取液，分别是水提取液和乙醇提取液。
1.2.3抑菌实验
1.2.3.1配制M-H培养基称取水解酪蛋白18 g，溶于500 ml蒸馏水中。115℃高压灭菌20 min，冷却至60℃左右，倾注平皿(直径9 mm)，每平皿20 ml。
1.2.3.2接种实验菌株将试验菌株用无菌盐水配成菌液，使其浊度为0.5号麦氏标准管。用无菌棉纤将菌液均匀涂抹在平皿上，放置10 min后再打孔。
1.2.3.3打孔、上样用自制的直径为5 mm的无菌打孔器在平皿上均匀打孔7～9个。每孔加入一种中草药的提取液75 μl。35℃培养24 h，记录抑菌圈直径。
2结果
6种中草药对6种实验菌株的抑菌作用见表1。实验发现，两种方法分离中草药的活性成分，其抑菌效果无差异。
表16种中草药对实验菌株的抑菌圈直径表mm药材(略)
本实验选用的实验菌株既有革兰阳性球菌和杆菌，也有革兰阴性杆菌和真菌。6种中草药中，黄连素和南蛇藤对6种试验菌株均有抑菌作用，因此具有广谱的抗菌性。黄连素的抑菌作用最强，南蛇藤次之。草乌与苦参仅能抑制细菌的生长而对真菌没有抑制作用，蒲黄与莽草则对细菌和真菌均无抑制作用。
3讨论
本次实验的结果与中草药的特性并不完全一致，如蒲黄。蒲黄为常用的中草药，具有活血化瘀和通淋的功效，但本次实验却未发现其有抑菌作用。也许本次实验中应用的实验菌株还不够广泛，有条件的实验室可以继续求证更多的中草药更广泛的抑菌特性。中草药的研究在我国具有悠久的历史和重要的意义，其中黄连素的临床应用已经证明其价值。在不规范使用抗生素的今天，已经造成越来越多的致病菌广泛的耐药性，以致于药物的更新跟不上细菌产生耐药性的变化。因此，对于中草药的研究就显得更为重要。在应用中草药进行杀菌治病或防治病虫害(如用于鱼类防病)的过程中，中草药具有无污染、不易产生耐药性等特点。
参考文献：
[1]周成明.80种常用中草药栽培提取营销[M].北京：中国农业出版社，2003：168192.
[2]吴寿金.现代中草药成分化学[M].北京：中国医药科技出版社，2002：132160.
[3]王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京：科学出版社，1999：231245.
[4]刘小平，邬国军.医学微生物学实验指导[M].西安：世界图书出版公司西安分公司，2002：106134.
[5]郭积燕.微生物检验技术[M].北京：人民卫生出版社，2002：68124.
(1.华中科技大学医院，湖北 武汉430074；2.黄石理工学院医学院，湖北 黄石435000), 百拇医药(汪俊汉 毛卫春)
关键词：中草药；活性成分；提取；抑菌实验
中草药的应用在我国具有悠久的历史，其药用价值也逐渐被欧美国家所接收。为研究其抑菌特性，笔者对草乌等6种中草药进行了活性成分分离，并进行了抑菌实验。现报道如下。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1中草药草乌、南蛇藤、蒲黄、莽草、苦参、黄连，自采或购买。
1.1.2实验菌株大肠埃希菌(ATCC25922)，金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，铜绿假单胞菌(ATCC27853)，枯草杆菌，假丝酵母菌和酿酒酵母菌。由卫生部临床检验中心提供的质控菌株。
1.1.33M-H培养基药敏实验用，由杭州微生物试剂厂生产。
1.2方法
1.2.1中草药活性成分的提取方法用水煎煮法和乙醇提取法。
1.2.2草乌活性成分的提取
1.2.2.1水提取法称生草乌14 g，掰成小块后加入少量蒸馏水50 ml，用搅拌机搅成糊状。按1 g草乌∶15 ml蒸馏水的比例再将蒸馏水补充到210 ml，移至家用煮中药的瓷罐内，用定时恒温搅拌器恒温加热2 h至沸腾，其间要不断补充缺失的水分。之后徐徐蒸发至50 ml，由于这时侯的草乌提取液非常粘稠，无法用三角漏斗自然过滤，因此用离心机以7 000 r/min的速度离心25 min。将所得滤液共67 ml，取25 ml为标准样品量，以及42 ml两份。-20℃冷冻保存2 h后，在-80℃下冷藏备用。
1.2.2.2乙醇提取法首先配置25%乙醇溶液100 ml。称量10 g生草乌，掰成小块后，加入少量25%乙醇溶液(50 ml)用搅拌机搅成糊状。按照1 g草乌∶10 ml的25%乙醇溶液的比例再将乙醇补充到100 ml，浸泡48 h(其间每隔2～3 h需震荡浸液，使之充分混合)。48 h后，将浸液移至家用煮中药的瓷罐内，用定时恒温搅拌器恒温加热至60℃(注意加热时在器皿上盖一块玻璃板，防止乙醇挥发过度)。同样，这时的混合液非常粘稠，无法用三角漏斗自然过滤，用离心机以7 000 r/min离心25 min。得滤液81 ml，取25 ml为标准样品量，以及56 ml两份。-20℃冷冻保存2 h后，在-80℃下冷藏。
1.2.2.3冷冻干燥取两种提取液25 ml封装，用冻干机干燥后-20℃冷藏。
1.2.2.4取样备用所得干燥后的样品呈絮状物，极易溶于水。取出全部干燥的样品，草乌的水提取液编为1号，称量有0.108 45 g，草乌的乙醇提取液编为2号，称量有0.142 65 g。在-20℃的条件下冷藏备用。
另外5种中草药活性成分的提取过程与草乌基本相同，在此不再重复。每种中草药得两份提取液，分别是水提取液和乙醇提取液。
1.2.3抑菌实验
1.2.3.1配制M-H培养基称取水解酪蛋白18 g，溶于500 ml蒸馏水中。115℃高压灭菌20 min，冷却至60℃左右，倾注平皿(直径9 mm)，每平皿20 ml。
1.2.3.2接种实验菌株将试验菌株用无菌盐水配成菌液，使其浊度为0.5号麦氏标准管。用无菌棉纤将菌液均匀涂抹在平皿上，放置10 min后再打孔。
1.2.3.3打孔、上样用自制的直径为5 mm的无菌打孔器在平皿上均匀打孔7～9个。每孔加入一种中草药的提取液75 μl。35℃培养24 h，记录抑菌圈直径。
2结果
6种中草药对6种实验菌株的抑菌作用见表1。实验发现，两种方法分离中草药的活性成分，其抑菌效果无差异。
表16种中草药对实验菌株的抑菌圈直径表mm药材(略)
本实验选用的实验菌株既有革兰阳性球菌和杆菌，也有革兰阴性杆菌和真菌。6种中草药中，黄连素和南蛇藤对6种试验菌株均有抑菌作用，因此具有广谱的抗菌性。黄连素的抑菌作用最强，南蛇藤次之。草乌与苦参仅能抑制细菌的生长而对真菌没有抑制作用，蒲黄与莽草则对细菌和真菌均无抑制作用。
3讨论
本次实验的结果与中草药的特性并不完全一致，如蒲黄。蒲黄为常用的中草药，具有活血化瘀和通淋的功效，但本次实验却未发现其有抑菌作用。也许本次实验中应用的实验菌株还不够广泛，有条件的实验室可以继续求证更多的中草药更广泛的抑菌特性。中草药的研究在我国具有悠久的历史和重要的意义，其中黄连素的临床应用已经证明其价值。在不规范使用抗生素的今天，已经造成越来越多的致病菌广泛的耐药性，以致于药物的更新跟不上细菌产生耐药性的变化。因此，对于中草药的研究就显得更为重要。在应用中草药进行杀菌治病或防治病虫害(如用于鱼类防病)的过程中，中草药具有无污染、不易产生耐药性等特点。
参考文献：
[1]周成明.80种常用中草药栽培提取营销[M].北京：中国农业出版社，2003：168192.
[2]吴寿金.现代中草药成分化学[M].北京：中国医药科技出版社，2002：132160.
[3]王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京：科学出版社，1999：231245.
[4]刘小平，邬国军.医学微生物学实验指导[M].西安：世界图书出版公司西安分公司，2002：106134.
[5]郭积燕.微生物检验技术[M].北京：人民卫生出版社，2002：68124.
(1.华中科技大学医院，湖北 武汉430074；2.黄石理工学院医学院，湖北 黄石435000), 百拇医药(汪俊汉 毛卫春)