RNA干扰及其在乳腺癌研究中的应用
乳腺肿瘤,,RNA干扰·乳腺肿瘤,1RNAi的发现,2RNAi的分子机理,3RNAi的特点,4RNAi的合成,5RNAi技术在乳腺癌中的应用,6展望,参考文献
【关键词】RNA干扰·乳腺肿瘤RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)引起的，广泛存在于动植物中的序列特异性转录后基因沉默，从而抑制其相应基因表达的过程。作为高效、特异的调节基因表达的技术，RNAi已成为基因功能研究的有力工具。
1 RNAi的发现
1996年，Arizona大学的Rich Jorgensen等[1]设想将更多的色素基因导入矮脚牵牛花中以求得到色彩更艳丽的花朵，但意外的是转基因的牵牛花中不仅没有新基因的表达，而原色素基因表达也受到抑制而使花朵出现花斑或条纹状，他们把这种现象称为“共抑制现象”。
1998年卡耐基研究院Fire等[2]首次提出了“dsRNA介导的RNA干扰”现象。他们将靶向Par1基因的dsRNA注入秀丽新小杆线虫(C.elegans)虫卵中，发现dsRNA抑制靶基因表达的能力比任一单链RNA至少高2个数量级，靶mRNA受到明显的抑制且呈现出可传递给后代的特异表型。随后此技术在全球得到广泛开展和应用，并在其它生物如果蝇、真菌、小鼠胚胎细胞中相继证实。
2 RNAi的分子机理
RNAi现象最初被认为与内源性RNA降解有关。dsRNA能够非常特异地降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA,而靶向基因的内含子或启动子则没有明显的抑制效应，表现出高度的序列特异性。Tush1等[3]发现果蝇胚胎提取物可能含有参与RNAi的成分，dsRNA在此提取物中孵育后能降低荧光素酶mRNA翻译形成荧光素酶的能力，提示靶mRNA降解可能与一种核酸酶有关，这种核酸酶是一种核糖核蛋白，称为RNA诱导的沉默复合物(RNAinduced silencing complex RISC)，已经从人工诱导的形成RNAi的果蝇细胞中分离。
目前研究认为，RNAi的分子机理分为两个阶段：①RNAi起始阶段：在RNAi的起始阶段，加入的dsRNA在一种具有RNaseⅢ样活性的dsRNA特异性核酸内切酶(dsRNA specific endonuclease,Dicer)作用下被切割成21~23nt的具有双链结构的小干扰RNA(siRNA)，这些siRNA具有5'磷酸、3'羟基末端以及2个游离nt突出，从而在RNAi调控途径中起着关键的作用[4]。②RNAi的效应阶段：在RNAi效应阶段，siRNA与RISC的无活性前体结合，在ATP作用下siRNA双链结构解旋并诱导形成有活性的RISC。有活性的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA上 ......
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