异常黑胆质与肾虚痰瘀的关系研究
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30360127)；新疆维吾尔自治区自然科学基金资助(98807)
摘要: 目的：探讨维医异常黑胆质证与中医肾虚痰瘀证的关系。方法：(1)归纳比较法观察异常黑胆质证及肾虚痰瘀证的分布状况；(2)应用生物化学发光等技术检测多形核白细胞发光强度(PMNCL)、淋巴细胞发光强度(LYCL)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)和丙二醛(MDA)，并进行分析；(3)统计方法采用样本均数比较的t检验、多个样本率的卡方检验及线性趋势卡方检验。结果：所观察的病例中异常黑胆质所占比例最大；在异常黑胆质证病例中肾虚痰瘀证占的89.41%；且随着增齡两者的检出率都随之升高,经统计学分析，二证均显示随年龄段的递增，呈增高的趋势(P=0.000)；维医异常黑胆质证及中医肾虚痰瘀证在症状、体证比较相似。结论：异常黑胆质证与肾虚痰瘀证相似，多见于常见老年病和疑难杂病中；二者可能是机体共同病理生理变化的不同医学理论的阐述；而自由基损伤可能是二者部分共同物质基础。
关键词：肾虚痰瘀; 异常黑胆质; 自由基; 衰老/老年病
Studies on shenxutanyu and Abnormal Savda and free radical
XU Weifang, Halmurat, Abdureyimu
(Department of Respiratory, Thirtd Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University,Urumqi 830000, China)
Abstract: Objective: To explore the relation of Abnormal Savda and Shenxutanyu, and study the pathogenesis of Weigurol nationality's senility or aging disease in Chinese Medicine. Methods: (1)The distribution of Abnormal Savda were analysed in 868 cases including their findingout rate in three age groups; (2) The distribution of Shenxutanyu was sized up in 406 cases of Abnormal Savda as well the findingout rate of Shenxutanyu syndrome in Urumqi population; (3)Subjects'blood serum concentration of superoxide dismutase(SOD) Glutathione peroxidase(GSHPx) and malondialdehyde(MDA) were measured by chemiluminescence methods. Results: Among 868 cases, the percentage of Abnormal Savda was 46.77%, which was the highest one. The percentage of Shenxutanyu sign was 89.41% among 406 cases. And we found with age getting increasingly, the findingout rate of Shenxutanyu andAbnormal Savda raised simultaneously (P<0.001). Conclusion: It is found the closely intrinsic relationship of the Shenxutanyu sign and the Abnormal savda sign, and Free radical should be their partly substance basis.
Key words: shenxutanyu; Abnormal Savda; free radical; senility/aging disease
生、长、壮、老已是人类社会普遍存在的自然规律，如何理解这一衰老过程，中医学认为肾虚痰瘀是衰老及老年病的病生基础和重要特征[1,2],虽然衰老及老年病尤在晚期有多脏虚损、气血失和，但肾虚是其本源，肾精亏虚以致肾阳虚挾痰挾瘀更能准确全面地反映衰老的本质，是衰老的主体；而同样是传统医学之一的维吾尔医药学,认为异常黑胆质——各种异常体液燃烧的最终产物和表现形式是许多顽症痼疾和衰老的主要因素[3]。通过近年来在新疆维吾尔人群中开展肾虚痰瘀和异常黑胆质中的分布情况的研究，认识到二者之间存在着内在联系，且肾虚痰瘀证与异常黑胆质证的部分物质基础为自由基的损伤。
1资料与方法
1.1研究对象各种异常体液型维吾尔族患者868例，其中男性420例,女性448例，年龄18～65岁，平均年龄(41.32±11.35)岁；肾虚痰瘀型患者汉族88例，其中男性58例,女性30例，年龄20~60岁，平均年龄(43.12±12.88)岁；均为1996~2002年在自治区维吾尔医医院、自治区维吾尔医研究所及新疆医科大学附属中医医院就诊者。正常对照组36例，经体检均无心、肺、肝、肾等疾病的健康者，为在新疆生活的维吾尔族，其中男性19例，女性17例，年龄23~66岁，平均年龄(40.25±8.62)岁。
1.2纳入标准
1.2.1中医肾虚痰瘀证诊断标准根据《中华人民共和国国家标准·中医临床诊疗术语证候部分》，并参考《中医诊断学》(第5版)拟定标准。主要症状：(1)精神倦怠，面色恍白或黧黑；(2)胸闷脘痞、胀痛或刺痛；(3)腰膝酸软，畏寒怕冷；(4)舌淡紫或紫暗有瘀斑、苔薄白或滑腻；(5)脉沉弱或弦涩。次要症状：(1)头身困重，痰涕多；(2)小便清长，夜尿多；(3)肢体麻木，肌肤甲错或肿硬；(4)早衰，耳鸣，发脱，健忘。以上具备主症3项、次症2项或主症2项、次症3项为标准。
1.2.2异常黑胆质及异常血液质、异常胆液质、异常粘液质的分型诊断严格按照《维吾尔医学诊断学》标准执行。
1.2.3各疾病的诊断标准按照《内科学》(第3版)执行。
1.2.4年龄段界定老年人：>60岁;中年人:40岁~59 岁;年轻人:18 岁~39岁。
1.3仪器与试剂仪器:SHG1型生物化学发光仪(上海上立检测仪器厂)；精密移液器(法国Gilson公司)；低温冰箱(日本Sanyo公司)；721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);PHS25型PH计(上海雷磁仪器厂)；TGL16B型台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。试剂:刀豆蛋白A(美国Sigma公司产品)；植物血球凝集素(上海市医学化验所产品)；淋巴细胞分离液(上海试剂二厂生产)；鲁米诺，酵母多糖(美国Sigma公司产品)；三乙胺，无水乙醇(上海试剂三厂产品)；DHanks营养液(自制)；SOD、GSHPx、MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；磷酸缓冲液(PBS)自配。
1.4实验方法
1.4.1采血符合诊断标准的患者各组患者均在早晨空腹采静脉血3 ml，注入含有20 μl肝素钠的试管中，轻轻遥匀，以4℃保存备用。
1.4.2多形核白细胞化学发光强度(PMNcl)的测定取新鲜抗凝全血100 μl于测量管中，加PBS溶液700 μl和100 μl鲁米诺，37℃保温20 min后测定本底发光强度6 s，再加调理的酵母多糖100 μl，迅速摇匀，立刻测定刺激后的发光强度6 s， 直到峰值出现(加酵母多糖后约30 min)。
1.4.3淋巴细胞化学发光强度(Lycl)的测定用淋巴细胞分离液血中分离淋巴细胞，用DHanks 液冲洗淋巴细胞几次，调细胞浓度为1×106个/ml。取淋巴细胞悬液100 μl，并加DHanks液750 μl于测量管中，加鲁米诺100 μl，于37℃保温30 min后测定本底发光强度6 s，再加PHA 50 μl，迅速摇匀后立刻测定刺激后的发光强度6 s，直至峰值出现(加PHA后约10 min)。
1.4.4SOD、GSHPx、MDA的测定按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书由专人来测定。
1.5统计学处理采用PEMS3.0软件包进行统计学分析，数据以均数±标准差(±s)表示，显著性检验为两独立样本的T检验及多个样本率比较的卡方检验、线性趋势卡方检验。
2结果
2.1异常黑胆质型病人的分布在总的观察病例中，异常黑胆质例数最多(406例)，老年组异常黑胆质病人分布也最多，检出率高于中年组并明显高于青年组，经三个样本率的各自两两比较，老年组、中年组与青年组间差异均有统计学意义(P<0.05)，而老年组与中年组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1、2。
表1异常黑胆质证在不同年龄段中的检出率及多个样本率的比较[略]
表2异常黑胆质证在不同年龄段中检出率的两两比较(略)
2.2肾虚痰瘀证在异常黑胆质患者及其在维吾尔患者中的分布老年组肾虚痰瘀证在异常黑胆质患者中分布最多(363例),占89.41%。在3个年龄段中，老年组的阳性率高于中年组并明显高于青年组，分别为53.73%、46.75%和29.33%，经3组样本率的各自两两比较，老年组、中年组与青年组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，而老年组与中年组间差异无统计学意义(P>0.05),见表3、4。
表3肾虚痰瘀证在不同年龄段中的检出率及多个样本率的比较[略]
表4肾虚痰瘀证在不同年龄段中检出率的两两比较(略)
2.3肾虚痰瘀证与异常黑胆质在自由基方面的变化异常黑胆质证与肾虚痰瘀证组与正常对照组比较，抗氧化酶活性尤为GSHPX不同程度地下降(P<0.001)，SOD水平不同程度增高(P<0.05)，脂质过氧化产物MDA增多，PMN及LY活性氧代谢增强，经检验均有统计学意义(P<0.05~0.01)；但异常黑胆质证与肾虚痰瘀证比较无统计学意义(P>0.05)。对所有测试对象进行年龄段及性别上的预先比较，均无差异，故将男女及各年龄段合并统计，见表5。
2.4异常黑胆质证与肾虚痰瘀证分析、比较异常黑胆质证与肾虚痰瘀证在证候方面的比较结果：异常黑胆质证在精神面貌、肌肤、小便、舌苔及脉象等方面较相似，但还体现了眼部、体温及睡眠、口味的变化，以及小便的颜色、性状的不同。可见两者在证候方面有很多类似之处，但在临床上并非一一对应，也略有差别,见表6。
表5异常黑胆质证和肾虚痰瘀证与正常对照组氧化一抗氧化指标及机体免疫细胞活性氧代谢的比较(略)
表6肾虚痰瘀与异常黑胆质证候比较[略]
3讨论
3.1异常黑胆质致衰老和痼疾观通过分析异常黑胆质患者的分布情况和种种病例，首先表明了现代医学中的老年病或疑难顽疾中，由异常黑胆质所导致的病例最多，引起的病变最为复杂、顽固难治，如重症哮喘、心血管疾病、糖尿病及肿瘤等；并且在3个年龄段中，只有异常黑胆质证阳性率随增龄呈递增趋势，与年龄的增长呈显著正相关，老年组异常黑胆质证阳性率明显高于中年组和青年组。维吾尔医[3]认为任何体液无论是血液质、胆液质、粘液质还是黑胆质在强热作用下“燃烧”，丧失其正常生理功能都会形成异常黑胆质性体液，也就是说不同体液性疾病发展到最后均常以异常黑胆质性疾病告终，是机体老化的主要病理因素的物质基础[4]。维医还认为异常黑胆质体液份量重、质地稠，易在血管壁上沉着，形成血管硬化、高血压；易在神经、组织中形成阻塞，导致神经性病变；人体内异常黑胆质体液量的增加导致沉淀和刺激，引起肿瘤等[5]。而上述疾病在老年人中多见和多发，同时也促进了衰老的进程。维医学还认为，随着年迈，人的气质更趋向于干寒，即体内的黑胆质体液增多，若有强热的作用，黑胆质体液极易发生异常，是导致衰老、老年病及痼疾的根本所在[6,7]。有关研究提示，若定期适量服用异常黑胆质成熟剂和清除剂，将是抗衰老、防治痼疾的新战略[8]。
3.2肾虚痰瘀是维吾尔人衰老及疾病的病生基础本研究归结肾虚和痰瘀交阻，为一种综合证。对维吾尔族异常黑胆质患者进行了证候调查、判断和分析的结果表明，异常黑胆质者大多不同程度具有上述典型的肾虚痰瘀证之征象，并随着增龄也出现此证递增的趋势。提示肾虚痰瘀同样也为维吾尔人衰老及疾病的病生基础，即维吾尔人同样亦具备肾虚痰瘀证及其病生理变化的中医学特点，即精元之气会随增龄日渐消耗，当发展到肾阳虚，则人的原动力不足，其生命力、生殖力、体力和智力都会随之下降，直接导致衰老，甚至众病峰起[9]，而肾阳虚、气化无力所生的病理产物——痰浊、瘀血是老年病临床中的突出症状，还是导致衰老明显或加重以及老年发病过程中不可忽视的病理因素[10~12]，是衰老的催化剂。临床上许多老年性疾患和疑难杂病，如本组观察汉族88例肾虚痰瘀证患者和406例维吾族导族异常黑胆质型患者的各种疾病中，多见慢支并肺气肿、肺心病、哮喘、冠心病、脑血管病、高脂血症，以及糖尿病、老年性痴呆、肿瘤等，都有肾虚痰瘀或异常黑胆质作祟。因此认为，在衰老的进程中，随着年龄的增长，以肾虚尤其是肾阳虚为本，痰瘀为标，本虚标实，互为影响，互为因果，成为一种恶性循环，也促进了维吾尔人的衰老，加剧其老年病的发生、发展。
3.3异常黑胆质和肾虚痰瘀证的关系在病因病机方面，异常黑胆质和肾虚痰瘀都是启动衰老及老年病的主要环节和基本因素，具备“异病同证”的相同特色；在人群的分布中异常黑胆质型患者且随着增龄在不同年龄段阳性率逐渐增多，老年组最高，具有随增龄而上升的趋势；而肾虚痰瘀证在异常黑胆质型患者中所占比例为89.6%，同样是随着增龄其阳性率亦升高；所致的疾病都为常见老年病或疑难病，其种类基本相同；从而体现了两证的一致性，是同一问题不同医学的征象。虽然两证在临床上并不完全吻合、存在交叉处，考虑与不同医学病症的观察角度有关，如维吾尔医学多比较注意患者的眼部变化、肌肤、口味、尿色及其性状等方面；而中医学辩肾虚或肾阳虚证时多注重患者的主观感受。二者具有内在的联系，且有共同的物质基础。
3.3.1自由基是肾虚痰瘀与异常黑胆质的部分物质基础首先，以肾虚为本、痰瘀为标导致的恶性循环过程，与自由基衰老学说及其进程颇为相似[13,14]。罗陆一[15]报道，肾虚确与自由基具有内在联系，当抗氧化酶活性降低/过氧化脂质堆积时，机体内的核酸蛋白质等有可能被自由基氧化，生物膜酶等就可能被损伤，从而出现一系列较广泛的病理改变。这和肾为元气之根，肾虚、五脏皆失温煦而诸病丛生有类似之处。陈晏珍等[16]发现，肾虚患者(66例)外周血细胞的SOD活性显著降低(P>0.01)；且补肾药之所以能延寿，抑制自由基反应可能是其作用机理之一；而当痰瘀增多时，会同步检测到血浆LPO及衍生物MDA等检出率增高，免疫细胞活性氧代谢增强，即PMNcl和LYcl增高，导致自由基代谢产物堆积，使错误蛋白积累、交联分子堆积均应属"痰瘀交阻"的实证范畴[10]。
再针对异常黑胆质致衰老和痼疾观，在物质代谢方面，已知异常黑胆质与自由基有密切关联[17]，通过临床观察和实验研究[18,19]，先后筛选出临床上对许多痼疾有满意疗效的异常黑胆质成熟剂、清除剂进行了抗氧化功能方面的研究，证实了它们对多种活性氧的清除作用，并初次提出了异常体液“燃烧”的自由基损伤衰老学说[20]，即机体随增龄异常体液“燃烧”，使异常黑胆质堆积的过程可能就是自由基积累损伤机体的过程。因而在微观指标上，脂质过氧化代谢产物MDA和炎症细胞活性氧PMNcl、LYcl增加属异常体液过盛范畴，而SOD、GSHPX属维医"力"的范畴，抗氧化酶减少或失衡均是“力亏”的表现[21]，可见其机制仍与自由基代谢失调造成的衰老和疾病较符合。本研究肾虚痰瘀组和异常黑胆质组，其抗氧化酶活性尤以GSHPX水平显著低于正常对照组(P<0.001)，MDA水平显著高于对照组(P<0.05)，而多形核白细胞和淋巴细胞在发光强度增高明显(P<0.05)，与上述临床及理论研究相符，证实了上述两者确实均与自由基有密切联系，体现了随着增龄二者的氧化抗氧化与自由基变化的一致性。提示了不论是肾虚痰瘀证还是异常黑胆质证，随着增龄或疾病，患者机体抗氧化物质减少、消耗、抗氧化功能下降，不能及时有效地清除自由基，使自由基含量增多，尤其是炎症细胞在“呼吸爆发”过程中产生大量的氧自由基[21]，是造成机体氧化抗氧化动态平衡遭到破坏的重要原因，使脂质过氧化损伤加重，从而引起细胞组织损伤。而这一过程正是肾精亏损、发展至肾阳虚衰及形成痰瘀互结的过程，亦正是异常体液堆积、“燃烧”最终形成异常黑胆质的过程。由此可见自由基可能是肾虚痰瘀和异常黑胆质产生的重要物质基础之一。
3.3.2但肾虚痰瘀与异常黑胆质证的关系本研究中两组SOD水平明显高于对照组SOD活力，排除了选择对象及测试条件不均衡性，考虑与机体对其病理状态产生过多的自由基可能有反馈性代偿功能有关,如马永新等[22,23]检测了170例5种常见疑难病症如高血压、冠心病、糖尿病及恶性肿瘤等，其SOD值均较健康对照组显著增高(P<0.001)，提示为机体内SOD活性增高以对抗因自由基产生过多的应激病理状态，SOD某些情况下有部分代偿功能，究其机制还需要今后工作中作进一步研究。
总之，联系自由基的反应特点，反映了异常黑胆质与肾虚痰瘀证不仅具有致病因素的同一性、有相似的人群和疾病分布，又有共同的部分物质基础，即以微观方面也有相通性；而且还具备“异病同证”的同一特色，反映了二者在宏观方面的相通性。最终明确了肾虚痰瘀证与异常黑胆质证具有本质的、内在的联系。
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1新疆医科大学附属中医医院呼吸科，新疆乌鲁木齐830000；
2新疆医科大学，新疆乌鲁木齐830054;
3新疆维吾尔医研究所, 新疆乌鲁木齐830000, http://www.100md.com(徐卫方 哈木拉提·吾甫尔 阿不都热依木·玉素甫)
摘要: 目的：探讨维医异常黑胆质证与中医肾虚痰瘀证的关系。方法：(1)归纳比较法观察异常黑胆质证及肾虚痰瘀证的分布状况；(2)应用生物化学发光等技术检测多形核白细胞发光强度(PMNCL)、淋巴细胞发光强度(LYCL)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)和丙二醛(MDA)，并进行分析；(3)统计方法采用样本均数比较的t检验、多个样本率的卡方检验及线性趋势卡方检验。结果：所观察的病例中异常黑胆质所占比例最大；在异常黑胆质证病例中肾虚痰瘀证占的89.41%；且随着增齡两者的检出率都随之升高,经统计学分析，二证均显示随年龄段的递增，呈增高的趋势(P=0.000)；维医异常黑胆质证及中医肾虚痰瘀证在症状、体证比较相似。结论：异常黑胆质证与肾虚痰瘀证相似，多见于常见老年病和疑难杂病中；二者可能是机体共同病理生理变化的不同医学理论的阐述；而自由基损伤可能是二者部分共同物质基础。
关键词：肾虚痰瘀; 异常黑胆质; 自由基; 衰老/老年病
Studies on shenxutanyu and Abnormal Savda and free radical
XU Weifang, Halmurat, Abdureyimu
(Department of Respiratory, Thirtd Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University,Urumqi 830000, China)
Abstract: Objective: To explore the relation of Abnormal Savda and Shenxutanyu, and study the pathogenesis of Weigurol nationality's senility or aging disease in Chinese Medicine. Methods: (1)The distribution of Abnormal Savda were analysed in 868 cases including their findingout rate in three age groups; (2) The distribution of Shenxutanyu was sized up in 406 cases of Abnormal Savda as well the findingout rate of Shenxutanyu syndrome in Urumqi population; (3)Subjects'blood serum concentration of superoxide dismutase(SOD) Glutathione peroxidase(GSHPx) and malondialdehyde(MDA) were measured by chemiluminescence methods. Results: Among 868 cases, the percentage of Abnormal Savda was 46.77%, which was the highest one. The percentage of Shenxutanyu sign was 89.41% among 406 cases. And we found with age getting increasingly, the findingout rate of Shenxutanyu andAbnormal Savda raised simultaneously (P<0.001). Conclusion: It is found the closely intrinsic relationship of the Shenxutanyu sign and the Abnormal savda sign, and Free radical should be their partly substance basis.
Key words: shenxutanyu; Abnormal Savda; free radical; senility/aging disease
生、长、壮、老已是人类社会普遍存在的自然规律，如何理解这一衰老过程，中医学认为肾虚痰瘀是衰老及老年病的病生基础和重要特征[1,2],虽然衰老及老年病尤在晚期有多脏虚损、气血失和，但肾虚是其本源，肾精亏虚以致肾阳虚挾痰挾瘀更能准确全面地反映衰老的本质，是衰老的主体；而同样是传统医学之一的维吾尔医药学,认为异常黑胆质——各种异常体液燃烧的最终产物和表现形式是许多顽症痼疾和衰老的主要因素[3]。通过近年来在新疆维吾尔人群中开展肾虚痰瘀和异常黑胆质中的分布情况的研究，认识到二者之间存在着内在联系，且肾虚痰瘀证与异常黑胆质证的部分物质基础为自由基的损伤。
1资料与方法
1.1研究对象各种异常体液型维吾尔族患者868例，其中男性420例,女性448例，年龄18～65岁，平均年龄(41.32±11.35)岁；肾虚痰瘀型患者汉族88例，其中男性58例,女性30例，年龄20~60岁，平均年龄(43.12±12.88)岁；均为1996~2002年在自治区维吾尔医医院、自治区维吾尔医研究所及新疆医科大学附属中医医院就诊者。正常对照组36例，经体检均无心、肺、肝、肾等疾病的健康者，为在新疆生活的维吾尔族，其中男性19例，女性17例，年龄23~66岁，平均年龄(40.25±8.62)岁。
1.2纳入标准
1.2.1中医肾虚痰瘀证诊断标准根据《中华人民共和国国家标准·中医临床诊疗术语证候部分》，并参考《中医诊断学》(第5版)拟定标准。主要症状：(1)精神倦怠，面色恍白或黧黑；(2)胸闷脘痞、胀痛或刺痛；(3)腰膝酸软，畏寒怕冷；(4)舌淡紫或紫暗有瘀斑、苔薄白或滑腻；(5)脉沉弱或弦涩。次要症状：(1)头身困重，痰涕多；(2)小便清长，夜尿多；(3)肢体麻木，肌肤甲错或肿硬；(4)早衰，耳鸣，发脱，健忘。以上具备主症3项、次症2项或主症2项、次症3项为标准。
1.2.2异常黑胆质及异常血液质、异常胆液质、异常粘液质的分型诊断严格按照《维吾尔医学诊断学》标准执行。
1.2.3各疾病的诊断标准按照《内科学》(第3版)执行。
1.2.4年龄段界定老年人：>60岁;中年人:40岁~59 岁;年轻人:18 岁~39岁。
1.3仪器与试剂仪器:SHG1型生物化学发光仪(上海上立检测仪器厂)；精密移液器(法国Gilson公司)；低温冰箱(日本Sanyo公司)；721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);PHS25型PH计(上海雷磁仪器厂)；TGL16B型台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。试剂:刀豆蛋白A(美国Sigma公司产品)；植物血球凝集素(上海市医学化验所产品)；淋巴细胞分离液(上海试剂二厂生产)；鲁米诺，酵母多糖(美国Sigma公司产品)；三乙胺，无水乙醇(上海试剂三厂产品)；DHanks营养液(自制)；SOD、GSHPx、MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；磷酸缓冲液(PBS)自配。
1.4实验方法
1.4.1采血符合诊断标准的患者各组患者均在早晨空腹采静脉血3 ml，注入含有20 μl肝素钠的试管中，轻轻遥匀，以4℃保存备用。
1.4.2多形核白细胞化学发光强度(PMNcl)的测定取新鲜抗凝全血100 μl于测量管中，加PBS溶液700 μl和100 μl鲁米诺，37℃保温20 min后测定本底发光强度6 s，再加调理的酵母多糖100 μl，迅速摇匀，立刻测定刺激后的发光强度6 s， 直到峰值出现(加酵母多糖后约30 min)。
1.4.3淋巴细胞化学发光强度(Lycl)的测定用淋巴细胞分离液血中分离淋巴细胞，用DHanks 液冲洗淋巴细胞几次，调细胞浓度为1×106个/ml。取淋巴细胞悬液100 μl，并加DHanks液750 μl于测量管中，加鲁米诺100 μl，于37℃保温30 min后测定本底发光强度6 s，再加PHA 50 μl，迅速摇匀后立刻测定刺激后的发光强度6 s，直至峰值出现(加PHA后约10 min)。
1.4.4SOD、GSHPx、MDA的测定按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书由专人来测定。
1.5统计学处理采用PEMS3.0软件包进行统计学分析，数据以均数±标准差(±s)表示，显著性检验为两独立样本的T检验及多个样本率比较的卡方检验、线性趋势卡方检验。
2结果
2.1异常黑胆质型病人的分布在总的观察病例中，异常黑胆质例数最多(406例)，老年组异常黑胆质病人分布也最多，检出率高于中年组并明显高于青年组，经三个样本率的各自两两比较，老年组、中年组与青年组间差异均有统计学意义(P<0.05)，而老年组与中年组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1、2。
表1异常黑胆质证在不同年龄段中的检出率及多个样本率的比较[略]
表2异常黑胆质证在不同年龄段中检出率的两两比较(略)
2.2肾虚痰瘀证在异常黑胆质患者及其在维吾尔患者中的分布老年组肾虚痰瘀证在异常黑胆质患者中分布最多(363例),占89.41%。在3个年龄段中，老年组的阳性率高于中年组并明显高于青年组，分别为53.73%、46.75%和29.33%，经3组样本率的各自两两比较，老年组、中年组与青年组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，而老年组与中年组间差异无统计学意义(P>0.05),见表3、4。
表3肾虚痰瘀证在不同年龄段中的检出率及多个样本率的比较[略]
表4肾虚痰瘀证在不同年龄段中检出率的两两比较(略)
2.3肾虚痰瘀证与异常黑胆质在自由基方面的变化异常黑胆质证与肾虚痰瘀证组与正常对照组比较，抗氧化酶活性尤为GSHPX不同程度地下降(P<0.001)，SOD水平不同程度增高(P<0.05)，脂质过氧化产物MDA增多，PMN及LY活性氧代谢增强，经检验均有统计学意义(P<0.05~0.01)；但异常黑胆质证与肾虚痰瘀证比较无统计学意义(P>0.05)。对所有测试对象进行年龄段及性别上的预先比较，均无差异，故将男女及各年龄段合并统计，见表5。
2.4异常黑胆质证与肾虚痰瘀证分析、比较异常黑胆质证与肾虚痰瘀证在证候方面的比较结果：异常黑胆质证在精神面貌、肌肤、小便、舌苔及脉象等方面较相似，但还体现了眼部、体温及睡眠、口味的变化，以及小便的颜色、性状的不同。可见两者在证候方面有很多类似之处，但在临床上并非一一对应，也略有差别,见表6。
表5异常黑胆质证和肾虚痰瘀证与正常对照组氧化一抗氧化指标及机体免疫细胞活性氧代谢的比较(略)
表6肾虚痰瘀与异常黑胆质证候比较[略]
3讨论
3.1异常黑胆质致衰老和痼疾观通过分析异常黑胆质患者的分布情况和种种病例，首先表明了现代医学中的老年病或疑难顽疾中，由异常黑胆质所导致的病例最多，引起的病变最为复杂、顽固难治，如重症哮喘、心血管疾病、糖尿病及肿瘤等；并且在3个年龄段中，只有异常黑胆质证阳性率随增龄呈递增趋势，与年龄的增长呈显著正相关，老年组异常黑胆质证阳性率明显高于中年组和青年组。维吾尔医[3]认为任何体液无论是血液质、胆液质、粘液质还是黑胆质在强热作用下“燃烧”，丧失其正常生理功能都会形成异常黑胆质性体液，也就是说不同体液性疾病发展到最后均常以异常黑胆质性疾病告终，是机体老化的主要病理因素的物质基础[4]。维医还认为异常黑胆质体液份量重、质地稠，易在血管壁上沉着，形成血管硬化、高血压；易在神经、组织中形成阻塞，导致神经性病变；人体内异常黑胆质体液量的增加导致沉淀和刺激，引起肿瘤等[5]。而上述疾病在老年人中多见和多发，同时也促进了衰老的进程。维医学还认为，随着年迈，人的气质更趋向于干寒，即体内的黑胆质体液增多，若有强热的作用，黑胆质体液极易发生异常，是导致衰老、老年病及痼疾的根本所在[6,7]。有关研究提示，若定期适量服用异常黑胆质成熟剂和清除剂，将是抗衰老、防治痼疾的新战略[8]。
3.2肾虚痰瘀是维吾尔人衰老及疾病的病生基础本研究归结肾虚和痰瘀交阻，为一种综合证。对维吾尔族异常黑胆质患者进行了证候调查、判断和分析的结果表明，异常黑胆质者大多不同程度具有上述典型的肾虚痰瘀证之征象，并随着增龄也出现此证递增的趋势。提示肾虚痰瘀同样也为维吾尔人衰老及疾病的病生基础，即维吾尔人同样亦具备肾虚痰瘀证及其病生理变化的中医学特点，即精元之气会随增龄日渐消耗，当发展到肾阳虚，则人的原动力不足，其生命力、生殖力、体力和智力都会随之下降，直接导致衰老，甚至众病峰起[9]，而肾阳虚、气化无力所生的病理产物——痰浊、瘀血是老年病临床中的突出症状，还是导致衰老明显或加重以及老年发病过程中不可忽视的病理因素[10~12]，是衰老的催化剂。临床上许多老年性疾患和疑难杂病，如本组观察汉族88例肾虚痰瘀证患者和406例维吾族导族异常黑胆质型患者的各种疾病中，多见慢支并肺气肿、肺心病、哮喘、冠心病、脑血管病、高脂血症，以及糖尿病、老年性痴呆、肿瘤等，都有肾虚痰瘀或异常黑胆质作祟。因此认为，在衰老的进程中，随着年龄的增长，以肾虚尤其是肾阳虚为本，痰瘀为标，本虚标实，互为影响，互为因果，成为一种恶性循环，也促进了维吾尔人的衰老，加剧其老年病的发生、发展。
3.3异常黑胆质和肾虚痰瘀证的关系在病因病机方面，异常黑胆质和肾虚痰瘀都是启动衰老及老年病的主要环节和基本因素，具备“异病同证”的相同特色；在人群的分布中异常黑胆质型患者且随着增龄在不同年龄段阳性率逐渐增多，老年组最高，具有随增龄而上升的趋势；而肾虚痰瘀证在异常黑胆质型患者中所占比例为89.6%，同样是随着增龄其阳性率亦升高；所致的疾病都为常见老年病或疑难病，其种类基本相同；从而体现了两证的一致性，是同一问题不同医学的征象。虽然两证在临床上并不完全吻合、存在交叉处，考虑与不同医学病症的观察角度有关，如维吾尔医学多比较注意患者的眼部变化、肌肤、口味、尿色及其性状等方面；而中医学辩肾虚或肾阳虚证时多注重患者的主观感受。二者具有内在的联系，且有共同的物质基础。
3.3.1自由基是肾虚痰瘀与异常黑胆质的部分物质基础首先，以肾虚为本、痰瘀为标导致的恶性循环过程，与自由基衰老学说及其进程颇为相似[13,14]。罗陆一[15]报道，肾虚确与自由基具有内在联系，当抗氧化酶活性降低/过氧化脂质堆积时，机体内的核酸蛋白质等有可能被自由基氧化，生物膜酶等就可能被损伤，从而出现一系列较广泛的病理改变。这和肾为元气之根，肾虚、五脏皆失温煦而诸病丛生有类似之处。陈晏珍等[16]发现，肾虚患者(66例)外周血细胞的SOD活性显著降低(P>0.01)；且补肾药之所以能延寿，抑制自由基反应可能是其作用机理之一；而当痰瘀增多时，会同步检测到血浆LPO及衍生物MDA等检出率增高，免疫细胞活性氧代谢增强，即PMNcl和LYcl增高，导致自由基代谢产物堆积，使错误蛋白积累、交联分子堆积均应属"痰瘀交阻"的实证范畴[10]。
再针对异常黑胆质致衰老和痼疾观，在物质代谢方面，已知异常黑胆质与自由基有密切关联[17]，通过临床观察和实验研究[18,19]，先后筛选出临床上对许多痼疾有满意疗效的异常黑胆质成熟剂、清除剂进行了抗氧化功能方面的研究，证实了它们对多种活性氧的清除作用，并初次提出了异常体液“燃烧”的自由基损伤衰老学说[20]，即机体随增龄异常体液“燃烧”，使异常黑胆质堆积的过程可能就是自由基积累损伤机体的过程。因而在微观指标上，脂质过氧化代谢产物MDA和炎症细胞活性氧PMNcl、LYcl增加属异常体液过盛范畴，而SOD、GSHPX属维医"力"的范畴，抗氧化酶减少或失衡均是“力亏”的表现[21]，可见其机制仍与自由基代谢失调造成的衰老和疾病较符合。本研究肾虚痰瘀组和异常黑胆质组，其抗氧化酶活性尤以GSHPX水平显著低于正常对照组(P<0.001)，MDA水平显著高于对照组(P<0.05)，而多形核白细胞和淋巴细胞在发光强度增高明显(P<0.05)，与上述临床及理论研究相符，证实了上述两者确实均与自由基有密切联系，体现了随着增龄二者的氧化抗氧化与自由基变化的一致性。提示了不论是肾虚痰瘀证还是异常黑胆质证，随着增龄或疾病，患者机体抗氧化物质减少、消耗、抗氧化功能下降，不能及时有效地清除自由基，使自由基含量增多，尤其是炎症细胞在“呼吸爆发”过程中产生大量的氧自由基[21]，是造成机体氧化抗氧化动态平衡遭到破坏的重要原因，使脂质过氧化损伤加重，从而引起细胞组织损伤。而这一过程正是肾精亏损、发展至肾阳虚衰及形成痰瘀互结的过程，亦正是异常体液堆积、“燃烧”最终形成异常黑胆质的过程。由此可见自由基可能是肾虚痰瘀和异常黑胆质产生的重要物质基础之一。
3.3.2但肾虚痰瘀与异常黑胆质证的关系本研究中两组SOD水平明显高于对照组SOD活力，排除了选择对象及测试条件不均衡性，考虑与机体对其病理状态产生过多的自由基可能有反馈性代偿功能有关,如马永新等[22,23]检测了170例5种常见疑难病症如高血压、冠心病、糖尿病及恶性肿瘤等，其SOD值均较健康对照组显著增高(P<0.001)，提示为机体内SOD活性增高以对抗因自由基产生过多的应激病理状态，SOD某些情况下有部分代偿功能，究其机制还需要今后工作中作进一步研究。
总之，联系自由基的反应特点，反映了异常黑胆质与肾虚痰瘀证不仅具有致病因素的同一性、有相似的人群和疾病分布，又有共同的部分物质基础，即以微观方面也有相通性；而且还具备“异病同证”的同一特色，反映了二者在宏观方面的相通性。最终明确了肾虚痰瘀证与异常黑胆质证具有本质的、内在的联系。
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1新疆医科大学附属中医医院呼吸科，新疆乌鲁木齐830000；
2新疆医科大学，新疆乌鲁木齐830054;
3新疆维吾尔医研究所, 新疆乌鲁木齐830000, http://www.100md.com(徐卫方 哈木拉提·吾甫尔 阿不都热依木·玉素甫)