研究报告

    毛细管等电聚焦/ 毛细管无胶筛分电泳二维蛋白质分离平台的构建

    刘和春 杨 春 杨 青 张维冰 张玉奎3

    (中国科学院大连化学物理研究所,国家色谱研究分析中心,大连116011)

    摘 要 设计并制作了一种新型的中空纤维接口,以此为核心构建了毛细管等电聚焦(CIEF) / 毛细管无胶

    筛分(CNGE) 电泳二维蛋白质分离技术平台,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分

    离平台,对血红蛋白样品进行了高效、快速分离分析,验证了该二维分离平台的可行性及分离效能。实验结果

    表明:二维分离系统总的峰个数和分离效能都比各自一维分离系统有较大提高。

    关键词 中空纤维接口,二维分离平台,毛细管等电聚焦电泳,毛细管无胶筛分电泳

    2003201227 收稿;2003210215 接受

    本文系国家973 人类重大疾病蛋白质组学研究项目(No. 973 ,001CB510202)

    1 引 言

    对于复杂的蛋白质样品,一维毛细管电泳(CE) 由于其应用电压和分离柱长的限制,因而限制了其

    实际柱效和峰容量。多维分离技术,因其潜在的高峰容量,在复杂样品的分离分析中倍受关注1 。对

    于细胞或组织的全蛋白质分析,传统的二维凝胶电泳(22D PAGE) 已成为实验室常规的分离分析方法。

    然而传统的平板凝胶电泳多为手工操作,较为费时、费力。随着后基因组时代的到来,迫切需要开发高

    通量、高分辨、高效率的分离分析方法以适应对复杂样品分离分析。

    多维CE 能提供比一维CE 更高的分辨率和峰容量。目前,关于二维毛细管电泳(22D CE) 分离蛋白

    的报道还较少2 ,3 ,其主要原因是二维分离模式间的联用接口制作有一定的困难。将传统的22D PAGE

    从平板转移到毛细管中的研究报道更少,这是因为在第一维的CIEF 模式中,CIEF 分别以酸和碱作为

    阳极液和阴极液,毛细管内运行的缓冲溶液为含载体两性电介质(CAs) 和样品的混合物,它们的化学性

    质差别很大,难以与其它CE 模式所使用的缓冲溶液相兼容,因而CIEF 与其它CE 模式联用存在一定

    难度。然而CIEF 本身独特的优点决定了其具有很高浓缩的能力,据报道其浓缩倍数可以高达500

    倍4 。在二维分离系统中,这种被压缩的区带满足第二维对进样量的要求, 因而在多维联用中,CIEF

    特别适合于选作第一维模式而倍受重视2 ,5 ......