第32 卷

    2004 年5 月

    分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第5 期

    647～650

    荧光素共振光散射法测定脱氧核糖核酸

    蔡朝霞 宋功武3 李 玲 刘立明

    (湖北大学化学与材料科学学院,武汉430062)

    摘 要 研究了咕吨类染料荧光素Fluorescein ( FL) 与DNA 作用的共振光散射光谱。加入DNA 后,在pH 6

    ～8 的范围内,荧光素在DNA 分子表面发生长距离自组装,在400 nm 处产生了增强的共振光散射峰,其发光

    强度与DNA 的浓度呈线性关系,线性范围为0. 04～3. 1 mg/ L ; 检出限为16μg/ L 。考察了影响因素和最佳

    反应条件,建立了用RLS 光谱测定ng 级DNA 的新方法。

    关键词 荧光素, 共振光散射技术,脱氧核糖核酸

    2003203217 收稿;2003212222 接受

    本文系中国分析测试基金资助项目(No. 99211)

    1 引 言

    染料与核酸的反应机理以及反应产物结构特征的研究,对于了解核酸生物反应历程、临床医学研究

    及核酸的分析测定均有重要的意义。根据染料与核酸的相互作用建立测定DNA 的分析方法已有不少

    报道,寻求新的简便、灵敏、准确的测定方法仍然是研究的热点。共振光散射法是继光度法和荧光法后

    又一简单灵敏的分析方法。Pasternack 等1 用普通荧光分光光度计所建立的共振光散射技术在生物大

    分子的识别上出现了丰富而灵敏的信号,表征了分子聚集的光谱特征。目前该技术已经应用于痕量药

    物2 ,3 ,表面活性剂4 测定。童沈阳和李克安等5 ,6 在1996 年将此技术应用于核酸的分析和研究,从而

    开辟了光散射技术在生化分析中的应用。

    荧光素是一种经典的荧光试剂,具有强的荧光,且荧光激发和发射波长均在可见光区,便于检测,应

    用广泛。有关荧光素与DNA 相互作用的研究报告并不多,我们曾研究过荧光素与牛血清白蛋白有相

    互作用7 。本实验利用共振光散射技术研究发现,荧光素与核酸能够相互作用,并且此分析方法快速

    简便,线性范围宽,灵敏度高,测定干扰小,用于合成样品的测定,结果令人满意。

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂 ......