生物素2亲和素放大酶联免疫吸附法测定双酚A

    魏孔吉 赵美萍

    3

    李元宗 常文保

    (北京大学化学与分子工程学院,北京100871)

    摘 要 建立了可用于快速、灵敏地检测双酚A的生物素- 亲和素放大酶联免疫吸附测定法,测得最佳实验

    条件为包被抗原浓度为13. 8 mg/L、抗体稀释为2. 4 ×105 倍,生物素化二抗和酶标亲和素的最佳稀释倍数分

    别为2000倍和500倍。在优化条件下,方法的线性范围0. 2～1000μg/L;最低检出限0. 05μg/L。所建立的

    方法用于食品和唾液中双酚A含量的测定,样品处理简单,结果满意。

    关键词 双酚A,生物素2亲和素放大酶联免疫吸附分析法,食品,唾液

    2004207225收稿; 2005201207接受

    本文系科技部科技基础性工作专项课题(Νo. 基2001215)

    1 引 言

    双酚A ( bisphenolA,BPA)是塑料工业的一种重要原料,广泛用作食品包装材料[ 1 ] 。BPA制成的树

    脂还可用作牙科治疗的包封剂或填充物[ 2, 3 ] 。已有研究报道BPA可从治疗后的牙齿中渗漏到唾液中,在有聚碳酸酯涂层的罐装食品中也已检测到了BPA[ 4, 5 ] 。由于双酚A对生物发育和生殖功能的破坏作

    用[ 6, 7 ] ,食品和唾液中痕量BPA的检测对保障食品安全和医疗安全等都具有十分重要的意义。

    目前检测BPA的方法以色谱分析法为主[ 8 ] 。在环境水样的检测方面经过预浓缩和衍生化等步骤

    检出限一般可以达到μg/L以下,但对于食品和生物体液样品,由于基体组成复杂,色谱分析前的样品

    处理步骤繁琐,有限的实际样品量,限制了预浓缩的倍数。高灵敏度的检测方法国内外报道得都很少。

    免疫分析基于抗原2抗体间的特异性结合反应,选择性好,通过选用合适的标记体系,可实现对复杂

    体系中痕量物质的快速灵敏检测。本研究以4, 42双(42羟基苯基)戊酸与牛血清白蛋白(BSA)偶联获得

    的全抗原免疫家兔,已成功制得了BPA的多克隆抗体,并建立了基于酶标二抗体系的竞争型BPA酶联

    免疫吸附测定方法[ 9 ] 。本实验进一步采用生物素2亲和素放大体系,使酶联免疫吸附分析法的检测灵敏

    度明显提高,抗体的消耗量大大减少,方法已成功地用于罐装玉米液和唾液等实际样品的测定。

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂 ......