新型pH敏感高分子相分离荧光免疫分析法测定兔血清中IgG

    林 鹏1, 2 郑 洪1 许金钩

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    1 (厦门大学化学化工学院,分析科学教育部重点实验室,厦门361005)

    2 (集美大学水产学院,厦门361021)

    摘 要 通过将N2异丙基丙烯酰胺(N IP) 、甲基丙烯酸丁酯(BMA)和甲基丙烯酸(MAA)共聚得到了一种新

    型的pH敏感高分子,其相转变pH (pHtr ) 在37℃下为6. 0;当溶液pH > 6. 0时,高分子溶解; pH < 6. 0时,高

    分子很快从溶液中沉淀出来。在竞争型免疫测定中,偶联在高分子上的兔免疫球蛋白G( IgG)和标准兔IgG

    在溶液中竞争性地与有限量的异硫氰酸荧光素标记抗体反应,根据pHtr以下免疫复合物沉淀的特性进行分

    离,建立了均相免疫反应、异相分离的兔IgG新型测定方法,线性范围为100～1000μg/L;检出限为10μg/L。

    方法灵敏、快速且操作简便,由于pHtr较之以前合成的敏感高分子更接近于中性,分离时可降低对抗原2抗体

    免疫复合物造成的损坏。用于兔血清中兔IgG的测量,结果令人满意。

    关键词 免疫测定, pH敏感相分离高分子, 免疫球蛋白G

    2004207229收稿; 2005201224接受

    本文系教育部博士点基金(No. 2000038404)和福建省自然科学基金(No. D0110002)资助课题

    1 引 言

    应用环境敏感高分子作为载体可有效解决均相和异相两种免疫分析模式所存在的局限性。其中,温度敏感高分子已成功地应用于免疫分析[ 1～3 ] ,但免疫反应只能在高分子的相转变温度( Ttr )以下进

    行。Ttr较低时,会影响免疫反应速度和反应效率;调高Ttr ,亦不能使均相反应在生理温度(37℃)条件下

    进行[ 4 ] 。pH敏感高分子由于在它的相转变pH (pHtr )附近发生沉淀与溶解的可逆性变化,可将其用作

    免疫分析载体,通过pH的调控实现均相反应、异相分离。与温度敏感高分子相比, pH敏感高分子可以

    在37℃进行免疫反应,提高了免疫反应的速度和效率。pH敏感高分子应用于免疫分析要求高分子的

    pHtr接近于中性的生理pH为最好,以降低分离时对抗原2抗体免疫复合物造成的破坏。但目前已有的

    高分子pHtr大多在3左右[ 5 ] 。文献[ 6 ]曾以N2异丙基丙烯酰胺(N IP)和甲基丙烯酸(MAA)合成了37℃ ......