柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法

    测定桑叶中的12脱氧野尻霉素

    欧阳臻

    3

    陈 钧 李永辉

    (江苏大学生物与环境工程学院制药工程系,镇江212013)

    摘 要 建立了芴甲氧酰氯( FMOC2Cl)柱前荧光衍生2高效液相色谱法测定桑叶中12脱氧野尻霉素(DNJ )的

    方法。桑叶经0. 05 mol/L盐酸提取,在pH 8. 5的硼酸盐缓冲溶液条件下,DNJ反应生成荧光产物,然后用高

    效液相色谱2荧光检测器测定。流动相为乙腈- 0. 1%醋酸(55∶45,V /V ) 。线性范围为0. 567～34 mg/L (相关

    系数r = 0. 9999) ;检出限为0. 03 mg/L。实验测得桑叶中DNJ含量为0. 24%;平均回收率为97. 1% , RSD为

    1. 35% ( n = 6) 。

    关键词 桑叶, 12脱氧野尻霉素(DNJ ) ,高效液相色谱法,柱前衍生化

    2004207207收稿; 2004211216接受

    本文系江苏省科技攻关基金资助项目(No: BE2004352)

    1 引 言

    桑叶为桑科植物桑(M orus alba L. )的干燥叶,始载于《神农本草经》,味苦,甘,性寒,归肺、肝经,具

    有疏风清热、平肝明目的功效;历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症,现代药理研究表明,桑叶有

    效成分之一多羟基生物碱具有显著的降血糖作用[ 1, 2 ] ,而12脱氧野尻霉素(DNJ )为桑叶中多羟基生物

    碱的一种特征性成分(一种糖苷酶抑制剂) ,是降血糖的主要活性成分。因此,建立一种可靠的桑叶中

    DNJ的含量测定方法可以控制药材质量。目前, DNJ 主要是采用硅烷衍生化后用GC2MS法鉴定其结

    构[ 3～5 ] ,因其分子结构中缺少发色团,很难采用高效液相色谱法直接测定含量。实验参考了文献[ 6 ] 并

    加以改进,利用荧光试剂芴甲氧酰氯( FMOC2Cl)与DNJ柱前衍生,然后用高效液相色谱法进行分离测

    定,方法简便快速,灵敏准确,并具有衍生反应可在室温下进行,反应速度快,操作步骤简单以及衍生产

    物稳定等特点。本方法用于桑叶中DNJ的测定,取得了满意的效果。国内尚未见应用本方法分析桑叶

    中DNJ含量的报道。

    2 实验部分

    2. 1 仪器和试剂

    JASCO LC1500高效液相色谱系统(日本分光公司) , 配有JASCO FP21520智能荧光检测器、JASCO ......