关键词 :氮;低温保藏;主动脉瓣;细胞存活;细胞增殖能力;组织培养

    摘 要:目的 主要观察液氮(-196℃)保存1～24mo不同时间段的瓣膜组织细胞活力及组织培养细胞生长情况的变化，为临床适用的人同种主动脉瓣的适宜保存期限提供实验依据. 方法 选取(18～35)岁健康成年男性脑死亡30min内取材的主动脉瓣膜20个.依据保存时间分为10组，Ⅰ组为新鲜对照组，取材后直接供实验用，Ⅱ～Ⅹ组为冷冻保存组，分别为冷冻保存1，3，6，9，12，15，18，21，24mo的瓣膜，每组2个瓣膜共6个瓣叶.冷冻保存组各组瓣膜缓慢降温(1℃·min-1 )，液氮中保存，实验时进行快速复温.瓣叶剪为细小组织块，一半置入培养瓶中做组织培养，相差显微镜下观察其组织细胞生长情况;另一半组织块用胰酶消化，光镜下做细胞计数并计算其细胞活力. 结果 Ⅰ组的组织细胞活力最高(93.8%)，Ⅱ～Ⅹ组细胞活力均较Ⅰ组明显减低(67.3%vs93.8%P<0.05);Ⅷ，Ⅸ，Ⅹ组细胞活力较Ⅱ～Ⅶ组瓣膜各组明显减低(52.4%vs76.5%P<0.05).Ⅰ组组织细胞1wk镜下可见，生长较快，4wk时镜下细胞数较多;Ⅱ～Ⅶ组组织细胞2wk镜下可见，生长较Ⅰ组稍缓慢，4wk时镜下细胞数减少;Ⅷ，Ⅸ，Ⅹ组细胞3wk镜下可见，生长较慢，4wk时镜下细胞数较Ⅰ组明显减少. 结论 液氮保存对人同种瓣膜组织细胞活力有显著影响，其程度随保存时间增长而加重;液氮保存1～15mo瓣膜组织细胞生长较新鲜瓣膜组稍晚，但组织细胞活力仍较高;液氮保存18～24mo瓣膜组织细胞活力明显减低，组织细胞生长缓慢，因此瓣膜组织活性及瓣膜耐久性可能减低.据此可认为，人同种主动脉瓣的适宜保存期限为15mo以内.

    Influence of cryopreservation on tissue viability of human aortic valve homografts

    XU Lei，HUANG Qing-Heng，ZHANG Peng，REN Hu-Ping，ZHAO Yan

    1 Department of Neurobiology Research，Medical School of Xi'an Jiaotong University，Xi'an710061，China，

    2 Department of Cardiothoracic Surgery，Shanghai Dongfang Hospital，

    3 Department of Surgery，Medical Center of Kentucky University ......