关键词: 胸腺素α1 ;融合表达;蛋白质纯化;生物活性

    摘 要:目的 利用融合表达载体pThioHisA的重组质粒pThioHisA-Tα1 ④，转化大肠杆菌TOP10得到的工程菌，来分离纯化表达的胸腺素α1 (thymosin alpha1，Tα1 ). 方法 将高效表达融合蛋白的工程菌用细胞破碎器裂解，经80℃热处理，离心上清采用Q-Sepharose FF阴离子交换色谱纯化融合蛋白.融合蛋白经CNBr裂解后用常压离子交换色谱纯化Tα1 单体.应用SDS-PAGE，2L-Tricine-SDS-PAGE和HPLC进行鉴定. 结果 SDS-PAGE分析表明菌体表达的融合蛋白占菌体总蛋白的400g kg-1 .经2L-Tricine-SDS-PAGE分析证实，融合蛋白可裂解出Tα1 单体，裂解物经简单的离子色谱可以纯化出Tα1 单体，HPLC鉴定纯化出的Tα1 纯度可达950g kg-1 以上.利用3 H-TdR进行的生物活性测定表明，在致有丝分裂原ConA存在的条件下，融合蛋白和Tα1 单体均具有刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力，与化学合成的Tα1 相比具有相似的生物活性. 结论 该方法是分离纯化Tα1 简便易行，经济有效的方法;同时也为Tα1 的分离纯化和大规模的开发生产奠定了基础.

    Purification and biological activity of recombinant thymosin alpha1

    SHI Ji-Hong，ZHANG Ying-Qi，ZHAO Ning，YAN Zhen，HAN Wei，ZHAO Yong-Tong

    Biotechnology Center，Fourth Military Medical University，Xi'an710033，China

    Keywords:thymosin alpha1;fusion expression;protein pu-rification;biological activity

    Abstract:AIM To purify and prepare thymosin alpha1(Tα1 ).METHODS The engineering bacteria TOP10includ-ing recombinant plasmid of a fusion expression vector pThio-HisA with the tandem Tα1 gene of4repeats(Tα1 ④)was used.after bacteria lysated by Bionee Cell Disruoter ......