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编号:10858732
胸腺素α1基因串联体的构建
http://www.100md.com 《第四军医大学学报》 2001年第16期
胸腺素α1,,胸腺素α1;串联体,0引言,1材料和方法,2结果,3讨论,参考文献
     关键词: 胸腺素α1;串联体

     0 引言

    胸腺素α1(Thymosin alpha1,Tα1)是从胸腺素组分5(TF5)中分离纯化出的热稳定酸性多肽[1] ,由28个氨基酸组成,Mr为3108.它是一种具有多种生物学活性的免疫调节剂,已应用于治疗乙肝、丙肝、癌症和免疫缺陷的研究中.虽然胸腺素α1有着广泛的应用前景,但由于其基因过短,很难利用基因工程方法实现直接表达,所以目前多是化学合成产品[2] ,价格比较昂贵,应用的推广受到限制.为了探索胸腺素α1多聚体的可能的生物学活性及其基因的体外表达,我们利用随机退火与PCR技术相结合的方法构建了胸腺素α1的多串体基因,并成功克隆,从而为进一步研究奠定了基础.

     1 材料和方法

    1.1 材料 pGEM-3zf(-)质粒,DH5α菌种由本室保存,T4多核苷酸激酶、EcoRⅠ,PstⅠ,T4DNA连接酶为TaKaRa产品,Taq DNA聚合酶、琼脂糖、DNA分子质量标准购自华美生物工程公司,DNA胶回收kit购自Promega公司,核酸片段由上海博亚生物技术有限公司合成:Sequence1(54bp)GACACCAGCAGCGAGATCACCACC-AAGGACCGGAAGGAGAAGAAGGAGGTGGTGSequence2(30bp)GAGGAGGCCGAGAACAGCGACGCC-GCCGTGSequence3(42bp)CTTGGTGGTGATCTCGCTGCTGGT-GTCCACGGCGGCGTCGCTSequence4(42bp)GTTCTCGGCCTCCTCCACCACCTC-CTTCTTCTCCTTCAGGTCPrimer1(38bp)GGAATTCATGTCTGATGCAGCCGTG-GACACCAGCAGCGPrimer2(35bp)GCACTGCAGTCAGTTCTCGGCCTCCT-CCACCACCT

    1.2 方法 参照TaKaRaT4多核苷酸激酶操作指南及《分子克隆实验指南》将合成的1~4核酸片段5'端进行磷酸化 ......

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