关键词: RT-PCR;一步法

     0 引言

    传统RT-PCR方法需要用反转录酶将RNA先反转录成cDNA，然后用Taq酶对cDNA进行PCR扩增，而且往往需要巢式PCR扩增才能提高结果的特异性和灵敏度，操作比较麻烦.有人发现Taq DNA聚合酶有一定的反转录活性[1] ，可以实现只用Taq DNA聚合酶进行反转录的单反应管一步法RT-PCR扩增.但是我们在实验过程中发现，利用Taq DNA聚合酶进行一步法RT-PCR反应成功率往往不高，这可能是因为Taq DNA聚合酶的反转录活性不高的原因造成的.为此，我们重新设计了实验方法，以提高用Taq DNA聚合酶进行RT-PCR的成功率.

     1 材料和方法

    1.1 材料 Thermolyne amplitronⅡPCR扩增仪(美国);dNTPs(Promage);Taq DNA聚合酶(Promaga，上海复华公司，澳大利亚金球公司);20份HCV RNA阳性血清分别由我校西京医院检验科、西安铁路中心医院检验科、西安医科大学第二附属医院检验科提供，这些血清抗-HCV均为阳性;10份抗-HCV阴性血清 ......