关键词: 免疫法;脱噬作用;抗体，单克隆;癌，肝细胞

    摘 要:目的 分析肝癌细胞凋亡过程中相关分子的表达情况，制备抗凋亡相关抗原的mAb. 方法 用60mL·L-1 乙醇作用6h诱导HCC-9204细胞凋亡.May-Grunwald-Giemsa(MGG)法染色观察细胞形态.流式细胞仪分析细胞DNA含量.环磷酰胺消减免疫法免疫10只小鼠，另取10只小鼠用常规法免疫作为对照.末次免疫后取鼠尾血清进行免疫细胞化学法检测.选取尾血清与凋亡细胞和非凋亡细胞的反应差异最明显者取脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2/0融合.ELISA法筛选.计算杂交瘤细胞融合率和抗体阳性率.有限稀释法连续克隆化.免疫细胞化学法进一步筛选.Western blot法分析mAb相关抗原的分子质量. 结果 MGG染色可见大部分细胞出现凋亡.流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰.实验组有2只鼠的尾血清在凋亡细胞呈强阳性，而与非凋亡细胞的反应很弱.两组的细胞融合率无明显差异;在凋亡细胞高表达，而在非凋亡细胞低表达的抗体的产生率也未见明显差异.实验组总的抗体产生率明显低于对照组(P<0.01)，在凋亡细胞与非凋亡细胞均高表达的抗体的产生率也明显低于对照组(P<0.01).筛选出1株在乙醇诱导的HCC-9204凋亡细胞核内高表达，而在非凋亡的HCC-9204细胞低表达的mAb.此mAb相关抗原的相对分子质量为75×103 . 结论 消减免疫法有助于制备抗凋亡相关抗原的mAb.

    Preparation of mAb against apoptosis┐associated antigen of hepatoma cells with subtractive immu-nization

    YANG Lian-Jun，SI Xiao-Hui，WANG Wen-Liang

    1 Department of Pathology，Faculty of Preclinical Medicine，Fourth Military Medical University，Xi'an710033，China，2 Institute of Stomatology，Ninth People's Hospital，Shanghai Second Medical University，Shanghai200011，China

    Keywords:immunization;apoptosis;antibodies，monoclon-al;carcinoma，hepatocellular

    Abstract:AIM To analyze the expression of associated molecules of hepatoma during apoptosis ......