关键词: 胰岛;分离

     0 引言

    目前临床胰岛移植的效果仍不理想，提供理想的胰岛或胰岛细胞是发展胰岛移植的基础.长期以来收获高纯度和高活力的胰岛或胰岛细胞是人们研究的目标.本文采用胶原酶分次消化与葡聚糖间断密度梯度离心法来探讨大鼠胰腺胰岛的分离与纯化.

     1 材料和方法

    1.1 胰岛分离 SD大鼠，共10只，不分雌雄，体质量160～200g.颈椎脱位法处死后，在无菌状态下迅速取出胰腺，置于4℃Hanks液中，去除胰腺周围的结缔组织，冲洗后剪成1mm3 的碎块，加入3mL预温的1g·L-1 的胶原酶(IV型，Sigma)消化液中，置38℃水浴箱中10min，将消化下来的上层细胞悬液吸出置入含小牛血清的4℃Hanks液中，终止消化.再将剩余的胰腺组织块加入2mL1g·L-1 胶原酶液中，重复以上实验2～3次，直到胰腺组织消化完全，将得到的胰岛细胞悬液用不锈钢丝网(80目)过滤，用4℃的Hanks液洗涤2次后，制备成2mL细胞悬液，立即准备纯化.

    1.2 胰岛纯化 采用葡聚糖间断密度梯度法 ......