关键词: 改良消减杂交法;滑膜细胞;类风湿性关节炎

     0 引言

    在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)中，关节内滑膜细胞(fibroblast-like synovial cells，FLS)的过度增生是造成关节软骨破坏和关节畸形的关键环节，为了研究滑膜细胞发生增殖的机制，我们采用赵忠良等人设计的改良消减杂交法[1] ，并以骨性关节炎(osteoarthritis，OA)滑膜细胞为对照筛选RA滑膜细胞中的高表达基因.

     1 方法

    将RA滑膜细胞和OA滑膜细胞分别设定为实验组和扣除组，用扣除组的cDNAs杂交扣除掉实验组中与前者相同的cDNAs，得到的就是目的产物:实验组中高拷贝数的或独有的cDNAs，也就是RA滑膜细胞中高表达的cDNAs.具体步骤为:①分别提取RA和OA FLS的mRNAs，对于实验组RA mRNAs，反转录时采用带锚定序列的反转录引物，引物序列为5'-AAGCAGTGGTAACAACGCAGAGTACT(30)N-1 N-3' ，同时在反应体系中加入根据mRNA5'GGG帽结构设计的5'锚定引物，序列为5'-AAGCAGTGGTAA-CAACGCAGAGTACGCGGG-3'，使其在反转录时在cDNA5'末端引入与3'端相同的锚定序列.对于扣除组OA mR-NAs ......