关键词: 缺血;再灌注;凋亡

     0 引言

    心肌缺血-再灌注损伤(ischemia-reperfusion in-jury，IPI)的发生机制尚未完全阐明.由于受血流动力学、激素、在体的神经反射的影响，在体的心肌损伤模型难以准确反映某些因素在心肌损伤中的作用.因此原代培养心肌细胞已成为一种研究心肌损伤的有用模型[1] .细胞调亡是细胞在一定的病理或生理条件下发生的一种程序化死亡.近年来研究表明，心肌细胞虽为非增殖细胞，对调亡有特殊的抵抗性[2] .但是现已发现调亡细胞损伤同样存在于心肌细胞，本实验采用纯化培养心肌细胞，研究缺血再灌注心肌细胞损伤模型中心肌细胞的调亡现象.

     1 材料和方法

    1.1 心肌细胞的培养

    参照Simpson等[3] 方法加以改进，取SD大鼠乳鼠(1～3d)共75只(本校实验动物中心提供).无菌条件下取出心脏剪碎、0.6g·L-1 胰蛋白酶和2.5g·L-1 胶原酶分次消化成单细胞悬液;1500r·min-1 离心10min，收集后用150mL·L-1 小牛血清(杭州四季青)DMEM培养液悬浮分散细胞，接种到培养瓶中，CO2 培养箱(50mL·L-1 CO2 ，950mL·L-1 氧气，37℃)培养，120min后翻瓶.前36h内培养液中加入5-溴脱氧核苷0.1mmol·L-1 ，抑制其心肌细胞增殖，每48h换液1次，实验用第3代心肌细胞.经心肌细胞鉴定，可见培养的心肌细胞占95%以上.

    1.2 心肌细胞的形态学鉴定

    采用上述分离方法培养的心肌细胞 ......