薄层扫描法测定黄杨宁片环维黄杨星D的含量
摘要: 目的: 测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量。 方法: 采用薄层扫描法，以氯仿-丙酮-二乙胺(25∶20∶2)为展开剂，测定波长为410nm，参比波长为700nm。 结果: 环维黄杨星D在1.017～10.17μg范围内线性关系良好，r=0.99570，平均回收率为97.31%，RSD=1.0%(n=5)。 结论: 该方法比传统的分光光度法简便快速、重现性好，可用于测定黄杨宁片的含量。
关键词: 黄杨宁片; 环维黄杨星D; 含量测定; 薄层扫描法
Determination of Cyclovirobuxine D in Huangyangning Tablets by TLCS LIU H an-zhen， SUN W ei
(Anhui Technical Teachers′college，Fengyang，233100，China)
Abstract: Objective:To determine cyclovirbuxine D in Huangyangning tablets.Methods:The quantitive analysis of Cyclovirobuxine D was determined by TLCS.Developer was Chloroform-Acetone-Diethyl amine(25∶20∶2).Detection wavelength was410nm and reference wavelength was700nm.Results:The calibration curve was linear in the range of1.017～10.17μg，correlation coefficient r=0.99570，the average recovery was97.31%，and the RSD=1.0%(n=5).Conclusion:The method is simple，rapid and with good reproducibility，It can be used for the quality control of Huangyangning tablets.
Key words: Huanyangning tablets; Cyclovirobuxine D; determination; TLCS
黄杨宁片是由黄杨宁Cyclovirobuxine D(从黄杨科多年生木本植物黄杨木中分离得)经加工制成的，具有行气活血、通络止痛之功效[1] 。现收载于《中国药典》2000年版Ⅰ部。现行标准中仅收载了黄杨宁片的分光光度法含量测定。为了更好地控制黄杨宁片的内在质量，本文采用薄层扫描法[2，3] 测定了黄杨宁片中环维黄杨星D的含量，并与紫外分光光度法进行比较研究。
1 仪器与试药
CAMAG TLC SCANNER3薄层扫描仪(瑞士CAMAG公司);日本岛津751型-UV分光光度计;层析用硅胶G(青岛海洋化工厂);环维黄杨星D对照品(中国生物制品检定所);黄杨宁片(芜湖张恒春药业有限公司生产);氢氧化钠、氯仿、丙酮、二乙胺、甲醇、磷酸二氢钠等均为分析纯。
2 实验方法[2，3] 与结果
2.1 薄层层析条件
硅胶G薄层板(100mm×200mm×0.25mm)，展开剂为氯仿-丙酮-二乙胺(25∶20∶2)，日光下定位。
2.2 扫描条件
将展开后环维黄杨星D斑点置扫描仪在370～700nm范围内测定其光谱图，环维黄杨星D对照品和供试品斑点均在410nm处有最大吸收，而阴性对照品未见干扰，故将测定波长定为λS =410nm，参比波长λR =700nm，采用反射法锯齿扫描。线性参数SX=3，狭缝为6.00mm×0.20mm，灵敏度中。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 薄层扫描法测定用
取本品40片，精密称定，研细，取粉末1.5412g(约相当黄杨宁10mg)，置分液漏斗中，加水和氢氧化钠试液各2ml，摇匀后，加氯仿10ml，振摇提取10min，静置，分取氯仿层，滤过，滤液即作为供试品溶液。
2.3.2 分光光度法测定用
取本品20片，精密称定1.4860g/20片=0.0743g/片(平均片重)，研细，称取W样1=0.1391g(样+纸)-0.0651g(纸)=0.0740g(样)、W样2=0.1406g(样+纸)-0.0651g(纸)=0.0755g(样)置50ml量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氢钠至刻度，80℃水浴恒温1.5h，取出冷却至室温，离心6min(3000r/min)，取上清液，即得。
2.4 对照品溶液的制备
2.4.1 薄层扫描法测定用
精密称取经105℃干燥至恒重的环维黄杨星D对照品10mg，置10ml量瓶中，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，即得对照品溶液。
2.4.2 分光光度法测定用
精密称取恒重的环维黄杨星D对照品W对=0.1028g(样+纸)-0.0778g(纸)=0.0250g(样)置250ml量瓶中，加甲醇70ml，使溶解用0.05mol/L磷酸二氢钠液至刻度。量取10ml，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钠稀释至刻度(环维黄杨星D为10μg/μl)，即得。
2.5 薄层测定试验
2.5.1 阴性样品溶液的制备 按处方量取除黄杨宁的其余药材或辅料，照制备工艺制成缺黄杨宁的阴性样品，取1.5412g的粉末，按供试品溶液制备项下的方法，制成缺黄杨宁的阴性样品溶液。 2.5.2 线性关系考察 精密吸取上述环维黄杨星D对照品溶液1，2，4，6，8，10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，扫描测定，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行回归(见表1)，得回归方程为:Y=60.579X+136.678，r=0.99570。环维黄杨星D在1.0174～10.17μg范围内呈线性关系。表1 每次扫描结果(略)
2.5.3 稳定性试验
吸取供试品溶液按上述方法及条件操作，对同一斑点每隔40min扫描1次，结果表明，在160min内斑点峰面积积分值基本稳定，其RSD=0.69%。
2.5.4 精密度试验
吸取供试品溶液相同量，分别点于同一块硅胶G薄层板上5个点，按上述方法测定其含量，RSD=1.43%。吸取供试品溶液相同量分别点在不同的硅胶G薄层板上，按上述方法测定其含量，RSD=2.0%。
2.5.5 重复性试验 对同一批的样品按上述方法测定5次(n=3)，其RSD=3.87%。说明本法重复性好。
2.5.6 加样回收率试验 精密称取已知含量为6.488mg·g-1 样品适量，分别精密加入环维黄杨星D1.017mg，按上述方法测定，计算回收率。其平均回收率为97.31%，RSD=1.0%(n=5)。 2.5.7 阴性对照干扰试验 取上述供试品溶液、阴性样品溶液及对照品溶液，按上述条件薄层分离后，进行光谱扫描，阴性样品在供试品与对照品相应的位置无吸收峰，说明处方中除黄杨宁的其它药材或辅料对环维黄杨星D的测定无干扰。
按上述方法测定3批样品，计算样品中环维黄杨星D的含量，结果见表2。表2 样品中环维黄杨星D的含量测定结果(略)
2.6 分光光度法测定
精密称取对照品与供试品溶液各5ml，分别置分液漏斗中，各加入溴麝香草酚蓝试液(取溴麝香草酚蓝18mg，置250ml量瓶中，加甲醇5ml，加0.05mol/L磷酸二氢钠至刻度)5ml，分别加氯仿10ml，振摇2min，静置1.5h。分取氯仿层，置含0.5g无水硫酸钠具塞试管中，取上清液，照分光光度法(《中国药典》(2000年版Ⅰ部)附录ⅤA)在410nm的波长处，分别测定吸收度。测定结果见表3。表3 两种方法在操作过程中所需要的时间以及测定结果(略)
测定结果表明:薄层扫描方法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量比传统的分光光度法简便、快速、准确。
3 讨论
3.1 黄杨宁片是中药制剂而成，成分比较复杂，采用氢氧化钠溶解后，再用氯仿提取，可有效除去杂质，使供试品得到纯化，便于薄层扫描。
3.2 试验的关键是样品及对照品的展开，本文采用的是氯仿-丙酮-二乙胺溶液体系的流动相作为展开剂，挥发性较强。在展开时，应在密闭条件下先饱和15min，再放在展开剂中展开，才能得到较理想的效果。
3.3 药材含量测定表明，不同批号的黄杨宁片的环维黄杨星D的含量虽为标示量的90.0%～110.0%，但含量差异较大，因此生产厂家应严格控制投料用药材质量，以保证产品质量。
3.4 本文建立的薄层扫描方法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量比传统的分光光度法简便、快速、准确，为黄杨宁片的含量测定提供了一个新的方法，具有一定的推广应用价值。
参考文献:
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社，2000:575-575.
[2] 吕武清.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社，1997:308-308.
[3] 孙毓庆.薄层扫描法及其在药物中的应用[M].北京:人民卫生出版社，1996:221-221.
作者简介: 刘汉珍(1968-)，女(汉族)，安徽凤阳人，现任安徽技术师范学院讲师，硕士学位，主要从事中药学、中药鉴定学的教学与科研.
(安徽技术师范学院，安徽凤阳 233100)
收稿日期: 2005-01-10, http://www.100md.com(刘汉珍，孙 伟)
关键词: 黄杨宁片; 环维黄杨星D; 含量测定; 薄层扫描法
Determination of Cyclovirobuxine D in Huangyangning Tablets by TLCS LIU H an-zhen， SUN W ei
(Anhui Technical Teachers′college，Fengyang，233100，China)
Abstract: Objective:To determine cyclovirbuxine D in Huangyangning tablets.Methods:The quantitive analysis of Cyclovirobuxine D was determined by TLCS.Developer was Chloroform-Acetone-Diethyl amine(25∶20∶2).Detection wavelength was410nm and reference wavelength was700nm.Results:The calibration curve was linear in the range of1.017～10.17μg，correlation coefficient r=0.99570，the average recovery was97.31%，and the RSD=1.0%(n=5).Conclusion:The method is simple，rapid and with good reproducibility，It can be used for the quality control of Huangyangning tablets.
Key words: Huanyangning tablets; Cyclovirobuxine D; determination; TLCS
黄杨宁片是由黄杨宁Cyclovirobuxine D(从黄杨科多年生木本植物黄杨木中分离得)经加工制成的，具有行气活血、通络止痛之功效[1] 。现收载于《中国药典》2000年版Ⅰ部。现行标准中仅收载了黄杨宁片的分光光度法含量测定。为了更好地控制黄杨宁片的内在质量，本文采用薄层扫描法[2，3] 测定了黄杨宁片中环维黄杨星D的含量，并与紫外分光光度法进行比较研究。
1 仪器与试药
CAMAG TLC SCANNER3薄层扫描仪(瑞士CAMAG公司);日本岛津751型-UV分光光度计;层析用硅胶G(青岛海洋化工厂);环维黄杨星D对照品(中国生物制品检定所);黄杨宁片(芜湖张恒春药业有限公司生产);氢氧化钠、氯仿、丙酮、二乙胺、甲醇、磷酸二氢钠等均为分析纯。
2 实验方法[2，3] 与结果
2.1 薄层层析条件
硅胶G薄层板(100mm×200mm×0.25mm)，展开剂为氯仿-丙酮-二乙胺(25∶20∶2)，日光下定位。
2.2 扫描条件
将展开后环维黄杨星D斑点置扫描仪在370～700nm范围内测定其光谱图，环维黄杨星D对照品和供试品斑点均在410nm处有最大吸收，而阴性对照品未见干扰，故将测定波长定为λS =410nm，参比波长λR =700nm，采用反射法锯齿扫描。线性参数SX=3，狭缝为6.00mm×0.20mm，灵敏度中。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 薄层扫描法测定用
取本品40片，精密称定，研细，取粉末1.5412g(约相当黄杨宁10mg)，置分液漏斗中，加水和氢氧化钠试液各2ml，摇匀后，加氯仿10ml，振摇提取10min，静置，分取氯仿层，滤过，滤液即作为供试品溶液。
2.3.2 分光光度法测定用
取本品20片，精密称定1.4860g/20片=0.0743g/片(平均片重)，研细，称取W样1=0.1391g(样+纸)-0.0651g(纸)=0.0740g(样)、W样2=0.1406g(样+纸)-0.0651g(纸)=0.0755g(样)置50ml量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氢钠至刻度，80℃水浴恒温1.5h，取出冷却至室温，离心6min(3000r/min)，取上清液，即得。
2.4 对照品溶液的制备
2.4.1 薄层扫描法测定用
精密称取经105℃干燥至恒重的环维黄杨星D对照品10mg，置10ml量瓶中，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，即得对照品溶液。
2.4.2 分光光度法测定用
精密称取恒重的环维黄杨星D对照品W对=0.1028g(样+纸)-0.0778g(纸)=0.0250g(样)置250ml量瓶中，加甲醇70ml，使溶解用0.05mol/L磷酸二氢钠液至刻度。量取10ml，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钠稀释至刻度(环维黄杨星D为10μg/μl)，即得。
2.5 薄层测定试验
2.5.1 阴性样品溶液的制备 按处方量取除黄杨宁的其余药材或辅料，照制备工艺制成缺黄杨宁的阴性样品，取1.5412g的粉末，按供试品溶液制备项下的方法，制成缺黄杨宁的阴性样品溶液。 2.5.2 线性关系考察 精密吸取上述环维黄杨星D对照品溶液1，2，4，6，8，10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，扫描测定，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行回归(见表1)，得回归方程为:Y=60.579X+136.678，r=0.99570。环维黄杨星D在1.0174～10.17μg范围内呈线性关系。表1 每次扫描结果(略)
2.5.3 稳定性试验
吸取供试品溶液按上述方法及条件操作，对同一斑点每隔40min扫描1次，结果表明，在160min内斑点峰面积积分值基本稳定，其RSD=0.69%。
2.5.4 精密度试验
吸取供试品溶液相同量，分别点于同一块硅胶G薄层板上5个点，按上述方法测定其含量，RSD=1.43%。吸取供试品溶液相同量分别点在不同的硅胶G薄层板上，按上述方法测定其含量，RSD=2.0%。
2.5.5 重复性试验 对同一批的样品按上述方法测定5次(n=3)，其RSD=3.87%。说明本法重复性好。
2.5.6 加样回收率试验 精密称取已知含量为6.488mg·g-1 样品适量，分别精密加入环维黄杨星D1.017mg，按上述方法测定，计算回收率。其平均回收率为97.31%，RSD=1.0%(n=5)。 2.5.7 阴性对照干扰试验 取上述供试品溶液、阴性样品溶液及对照品溶液，按上述条件薄层分离后，进行光谱扫描，阴性样品在供试品与对照品相应的位置无吸收峰，说明处方中除黄杨宁的其它药材或辅料对环维黄杨星D的测定无干扰。
按上述方法测定3批样品，计算样品中环维黄杨星D的含量，结果见表2。表2 样品中环维黄杨星D的含量测定结果(略)
2.6 分光光度法测定
精密称取对照品与供试品溶液各5ml，分别置分液漏斗中，各加入溴麝香草酚蓝试液(取溴麝香草酚蓝18mg，置250ml量瓶中，加甲醇5ml，加0.05mol/L磷酸二氢钠至刻度)5ml，分别加氯仿10ml，振摇2min，静置1.5h。分取氯仿层，置含0.5g无水硫酸钠具塞试管中，取上清液，照分光光度法(《中国药典》(2000年版Ⅰ部)附录ⅤA)在410nm的波长处，分别测定吸收度。测定结果见表3。表3 两种方法在操作过程中所需要的时间以及测定结果(略)
测定结果表明:薄层扫描方法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量比传统的分光光度法简便、快速、准确。
3 讨论
3.1 黄杨宁片是中药制剂而成，成分比较复杂，采用氢氧化钠溶解后，再用氯仿提取，可有效除去杂质，使供试品得到纯化，便于薄层扫描。
3.2 试验的关键是样品及对照品的展开，本文采用的是氯仿-丙酮-二乙胺溶液体系的流动相作为展开剂，挥发性较强。在展开时，应在密闭条件下先饱和15min，再放在展开剂中展开，才能得到较理想的效果。
3.3 药材含量测定表明，不同批号的黄杨宁片的环维黄杨星D的含量虽为标示量的90.0%～110.0%，但含量差异较大，因此生产厂家应严格控制投料用药材质量，以保证产品质量。
3.4 本文建立的薄层扫描方法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量比传统的分光光度法简便、快速、准确，为黄杨宁片的含量测定提供了一个新的方法，具有一定的推广应用价值。
参考文献:
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社，2000:575-575.
[2] 吕武清.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社，1997:308-308.
[3] 孙毓庆.薄层扫描法及其在药物中的应用[M].北京:人民卫生出版社，1996:221-221.
作者简介: 刘汉珍(1968-)，女(汉族)，安徽凤阳人，现任安徽技术师范学院讲师，硕士学位，主要从事中药学、中药鉴定学的教学与科研.
(安徽技术师范学院，安徽凤阳 233100)
收稿日期: 2005-01-10, http://www.100md.com(刘汉珍，孙 伟)