Der p2重组胞壁型E.coliBCG穿梭表达载体的构建和鉴定
目的: 构建能够携带外源蛋白屋尘螨抗原(Der p2)基因并能在胞壁表达的E.coliBCG穿梭载体. 方法: 用PCR技术, 从结核分支菌毒株H37Rv基因中, 扩增结核分支杆菌19 kDa抗原的胞壁区及其上游调控元件(19ss)基因, 并克隆入含有Der p2基因的E.coliBCG穿梭载体pOLYG中. 用间接免疫荧光染色法, 检测该载体能够携带并表达的Der p2基因在牡牛分支杆菌宿主中表达. 结果: 经测序证实, 所克隆的19ss基因序列正确. 所构建的含有19ss基因的E.coliBCG穿梭载体(pCW)能完成在大肠杆菌和牡牛分支杆菌细胞之间的穿梭, 并介导抗生素抗性基因表达. 经免疫荧光检查, 外源基因Der p2以脂蛋白的形式表达于分支杆菌宿主的表面. 结论: 成功地构建了以胞壁嵌合形式表达外源蛋白的E.coliBCG穿梭载体.
(王睿), 百拇医药(史皆然, 李元, 戚好文, 李别虎, 范雄林)
(王睿), 百拇医药(史皆然, 李元, 戚好文, 李别虎, 范雄林)