单宁酶产生菌的筛选和发酵条件研究

    一

    7 郭 鲁 宏 杨 顺 楷 - _ _ ■ ■ _ 。 。 - ● 。 一， — — — — - ～ ( 中国科学院成都生物研究所 天拣药 物开放研究 实验 室 成都

    j

    6 1 o o 4 1 ) 9 2 _ 0

    摘 要 和用富集培养技术. 占 L 天栋褫分离得到具有较高单宁醇话性的黑曲酶 N o 1 7株( 4 呐 N o

    1 7 )该菌株能把五倍子 中的单宁酶法水解成被食子酸， 在对 N o I 7拧开展产 酶条件和参数惋 忆实验的基础 上 .

    进行了宴验 室酶法{ } I 备被食子酸试验. 井获得 产物 滩度为 1 4 I r L的被食子 酸 . 经大 孔碾附树 脂分离 . 最 终净

    产率达到 7 o %. 谖样 品经熔点刊定 、 元素分析、 r 比 、 红外等理忆方法 分析检恻 ， 结果均与{ 殳食子融标样 一致 .

    美■词 ； 士置{ 墨. 岜 匡 ； 盘王皿； 塞醛盐

    中圈涪分类号 Q 5 5 6 . 1 ：哪 ∞ ：Q 9 . 3 2 3 3

    s . r UDI ES ON SCREEN G OF TANNAS E- PRODUCI NG

    S TRAD S AND I 衄 m FERM ENTATI ON C l ONS

    GUO Lu ho n g＆ YANG , ~z u n Ea l

    ( 阳s 血 f B o o ' y. A md e r a ~5 ，0 r ， g d u 6 [ { ~ 0 4 1 )

    Ab s t r a c t { ： ^ n N o 1 7 w i t h h i e r I s n n a s e a c t i v i t y w a s i s o l a t e d u s i n g e ml c l u n e m- c u h me

    } l n i g u e f r o m n a t u r a l s o u I e e B .T h i s s t r a i n w a s a b l e I o h y d r o l ~e t a n n i n f x o m C h i n e s e g a I l o I 丑 I 1 r I i Ⅱi n t o g a l l i c

    a c i d ( G A ) . B a s e d O l l t h e s t u d i e s o Ⅱl a n n a ~· p ~l u e i n g c o n d i t i o n s . a n d 0 i 卫 f e r me n t a t i o n p a r a m e l e r s o f N o .

    J 7，t h e 印a r a I i 帆 o fGA wa s d e v e l o p e d o R l a h er a t o ~ s ca l e.T he r e ~x l t s s h o we d t h a t t h e G^C O I I ~ I O [ 1 wa s

    S h O U t 1 4. 1 g L，t h e I y i e l d o f G Ams u p t o 7 0 % b y H - e B l l s o f ma c r o r e f i c u l a t e r e s i n s e p a m | 蚰 . P h y s l e a l a n d

    c h emi c a l d a t a o f t h e叩 u c t r e d e t e m~ n e d，i n c l u d i n g mel t p o i n t ， de me n t a n a l y s e s ，Ⅱ a n d 【 R.T he s e d 阻

    we l ? ~i de n i le a 1 wi t h t h e a u t he c GA.

    Ke y wo r d s C h i n e s e g a l l o l 虮r L i Ⅱ； B s e；山 噌 Z 幢 ；g a U i c a c i d；f e r me n t a t i o n c o a a d i t i o n s

    单 宁酶( E C 3 . I . 1 . 如)主要 由真菌类的曲霉 属 ( 血 口 ： ) 、 青 霉属 ( 胁 ) 、 根霉 属( R h z o p n s ) 以及毛

    霉属( M u c o r ) 微生物产生， 尤其是产生于曲霉属的黑曲霉 ( ^. r 岍 r ) t l J . 特产于我国的五倍 于是倍蚜寄生于

    漆树科盐肤术上所形成 的虫痿¨ ， 含单 宁约 5 0 % 一7 0%L s ] . 提纯 的五倍 于单宁 为白色无 定形粉末 . 是 由 1个

    葡萄糖分子 与 6—8个授食于酸分于( G ^) 结合而 成的醑 . 单 宁酶对设食 于酰 基具有高度 的专 一性 ， 能把 五倍

    于 中的单 宁水解 为产物 GA. G A可作为医药 中间体 ， 又是食 品、 化妆 品及饲料的抗氧 化削 ， 近年来还 用作感 光

    树脂 的原 料普L 6 J ，已成为市场上需求量较大的一种 重要 医药 、 化工 原材 料 . 要开展 微生 物酶法生 产设食 于酸

    新工 艺 的研究 ， 筛选高括性单 宁酶 产生 菌是基础工作 . 本文报告借助富集培养技术 . 从天然杯分离筛 选出 l株

    具有较高单 宁酶 活性 的黑曲霉 ， 井 进行发 酵条 件及 G A的酶法制 备、 产物分离等试 验的结果 .

    1 材料和方法

    1 . 1 材 料

    五倍于 购 自四1 1 1 省古蔺县 ； 硅胶 G 为青岛海 洋化 工厂产 品 ； 单 宁 由上海 化学试 剂采 购供应 站经销 ； 其

    收稿 日期 ：1 9 9 7 · 1 0 q ) 8 接受 日期 ：1 9 9 8 — 0 4 · ∞

    国家 自然 科学基金( №： 3 9 2 . 7 0 0 1 6 ) 和 中国 科学腕成都地奥科学基盒资时 硬目

    I奉所在读博士生 2通讯联 系^ c c 洲鹊p 0 r _ d { 唱 叫t h )

    维普资讯 http:www.cqvip.com 4期 郭鲁宏 等：单 宁酶产生菌的筛选和发酵条件研究

    他试剂均为国产丹析 纯 、 化学纯

    1 . 2 培养基和培养条件

    J . 2 1 富集培养基 五倍子 粉 1 0 g； 水 J 0 mL

    J . 2. 2 察 氏培养基 蔗糖 3 0 g； N a ~ ' 0 3 3 . 0 g ； HP 0 41 . 0 g ；Mg S 0 4 · 7 H2 0 0 5 g ；F e S0 4 · 7 H 2 00 0 1 g ；加水定容

    至 l 0 0 0 mL.

    1 2. 3 无机盐一 葡萄糖培养基 葡萄糖 2 0 g ；t ~ r l , C I 1 0 g ；KH z P 0 4 8 g ；Na 2 HP 0 4· 1 2 0 5 g ；Mg S o | · 7 1 f 2 0 0 5

    g ；加水定容至 1 0 0 0Ⅱ l L .

    1 2. 4 黄豆粉培 养基 黄豆粉 5 g ； 葡萄糖 2 0 g ；N a C I 5 g ；K 2 HP 0 4 5 g ；酵母抽 提物 7 5 g；加水 定容 至l 0 0 0

    wL.

    1 . 2 5 可溶性淀 粉培养基 可溶性 淀粉 1 5 g l酵母抽提物 4 g ； } 啪 ......